Estudian los Efectos del Factor Transformante de Crecimiento Beta sobre la Producción de Eotaxina en los Fibroblastos Normales de la Dermis

• AUTOR : Bae S, Lee J, Shimizu K, Kuwazuka Y
• TITULO ORIGINAL : Increase Effect of Transforming Growth Factor on Eotaxin Production by Normal Cultured Dermal Fibroblasts Stimulated with Interleukin-4: Inhibitory Effect of Suplatast Tosilate on Eotaxin Production
• CITA : Immunological Investigations 39(2):93-102, 2010
• MICRO : El factor transformante de crecimiento beta podría tener un papel importante en la inflamación alérgica de la piel mediante la estimulación de la eotaxina por los fibroblastos de la dermis. El tosilato de suplatast evitaría la inflamación al inhibir la producción de eotaxina.

Introducción

La dermatitis atópica, la rinitis alérgica y el asma son enfermedades alérgicas en las que participan diversas quimioquinas, entre ellas la eotaxina. La eotaxina estimula la migración de los eosinófilos al sitio de la inflamación alérgica. La dermatitis atópica, una enfermedad mediada por linfocitos colaboradores (Th2), se caracteriza por una importante infiltración eosinofílica; sin embargo, los mecanismos que intervienen en el reclutamiento de estas células en la piel se conocen muy poco. Un trabajo demostró que la interleuquina (IL) 4 induce la producción de eotaxina en los fibroblastos de la dermis, y en un estudio previo realizado por los autores se comprobó una fuerte expresión de eotaxina en la piel de los enfermos con dermatitis atópica.

El factor transformante de crecimiento beta (TGF-beta) participa en múltiples funciones biológicas, por ejemplo en el crecimiento de los fibroblastos, en la cicatrización de las heridas y en el remodelado tisular. También regula las citoquinas Th1 y Th2. La IL-4, la IL-13 y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa) actuarían en forma sinérgica para estimular la producción de eotaxina en los fibroblastos nasales en los seres humanos; asimismo, el TGF-beta y la IL-13 aumentarían la producción de eotaxina en los fibroblastos de las vías aéreas. En el presente estudio, los autores analizaron si el TGF-beta estimula la producción y la expresión del ARN mensajero (ARNm) de la eotaxina en los fibroblastos de la dermis normal de los seres humanos, estimulados con IL-4.

El tosilato de suplatast es un nuevo fármaco antialérgico utilizado en el tratamiento del asma y de la dermatitis atópica. El agente inhibe las citoquinas Th2 y la infiltración de eosinófilos. En la investigación, los expertos estudiaron los efectos del tosilato de suplatast sobre la producción de eotaxina por parte de los fibroblastos, estimulados con IL-4 más TGF-beta.

Materiales y métodos

Se trabajó con fibroblastos humanos normales neonatales. Las células se cultivaron en medio modificado FGM CC-3132 con suero fetal bovino (10 mg/500 ml), factor de crecimiento fibroblástico (1 mg/500 ml), insulina (5 mg/500 ml) y antibióticos a 37ºC con CO₂ al 5%. El medio de cultivo se renovó cada 3 días y las células se cultivaron en monocapas en semiconfluencia. Los fibroblastos se cultivaron tanto en presencia de IL-4 como en ausencia ésta (0.05 a 5 ng/ml) y de TGF-beta (0.05 a 5 ng/ml), aisladamente o en combinación. En los cultivos estimulados con IL-4 y TGF-beta se evaluó el efecto del tosilato de suplatast (0.25 y 25 µg/ml) sobre la producción de eotaxina. A las 24 horas de la estimulación se recogieron los sobrenadantes para la determinación de la eotaxina por enzimoinmunoensayo; las células fueron lisadas para la detección del ARNm de la eotoxina mediante reacción en cadena de la polimerasa inversa. El análisis estadístico se efectuó con la prueba t.

Resultados

Los fibroblastos normales de la dermis, no estimulados, expresaron muy levemente el ARNm de la eotaxina; sin embargo, la incubación con IL-4 se asoció con un aumento de la producción de eotaxina y con mayor expresión del ARNm; el efecto fue dependiente de la dosis.

El TGF-beta (0.5 ng/ml) actuó en forma sinérgica con la IL-4 (0.5 ng/ml) sobre la producción de eotaxina y sobre la expresión del ARNm; por el contrario, la estimulación de los fibroblastos sólo con TGF-beta no se asoció con cambios significativos en la producción de eotaxina.

El TGF-beta en otras dosis (0.05 y 5 ng/ml) también aumentó la producción de eotaxina inducida por la IL-4 (0.5 ng/ml); la actividad máxima se registró con 0.5 ng/ml, de forma tal que ésta podría ser la dosis óptima, señalan los autores.

Los fibroblastos normales en cultivo fueron tratados con varias concentraciones de tosilato de suplatast después del agregado de IL-4 o de IL-4 más TGF-beta. El fármaco se asoció con una inhibición -dependiente de la dosis- de la producción de eotaxina y de la expresión del ARNm, inducida por la IL-4 o por la IL-4 más el TGF-beta.

Discusión

Los autores recuerdan que la eotaxina es un factor quimiotáctico para los eosinófilos; la proteína tiene un papel fundamental en las inflamaciones alérgicas en las que predominan estas células. La IL-4 estimula fuertemente la producción de eotaxina por los fibroblastos de la dermis normal.

La IL-4 y la histamina intervienen en la inflamación cutánea alérgica; en un trabajo previo, los autores revelaron que la histamina se asocia con la producción de eotaxina y con la expresión del ARNm de la eotaxina en los fibroblastos de la dermis. Las observaciones en conjunto sugieren que la eotaxina podría tener un papel primordial en la inflamación alérgica crónica de la dermis.

El TGF-beta se asocia con múltiples funciones biológicas; es producido por numerosas células, entre ellas, eosinófilos y fibroblastos dérmicos. Este factor podría participar en la inflamación crónica al estimular la producción de eotaxina. En el presente trabajo, el TGF-beta aumentó en forma sinérgica la liberación de la proteína y la expresión del ARNm por los fibroblastos de la dermis, estimulados con IL-4.

En opinión de los autores, el TGF-beta y la IL-4 aumentarían en forma directa la expresión del receptor de la IL-4 en los fibroblastos, y secundariamente, la producción de eotaxina. Igualmente, el TGF-beta actuaría en forma sinérgica con la IL-13 en la inducción de la producción de eotaxina.

El tosilato de suplatast es un agente antiasmático asociado con la inhibición de las citoquinas Th2; también es útil para el tratamiento de la dermatitis atópica y de la rinitis alérgica perenne. El fármaco inhibe la desgranulación de las células cebadas y la migración de los eosinófilos. En el presente trabajo, el tosilato de suplatast inhibió -en relación con la dosis- la producción de eotaxina y la expresión del ARNm de la eotaxina inducidas por la IL-4 sola o en combinación con el TGF-beta. Los hallazgos en conjunto sugieren que el TGF-beta podría tener un papel importante en la inflamación alérgica de la piel mediante la estimulación de la eotaxina por los fibroblastos de la dermis. El tosilato de suplatast evitaría la inflamación al inhibir la producción de eotaxina, añaden por último los autores.

Especialidad: Bibliografía - Dermatología