Los Efectos de las Progestinas Sintéticas en la Expresión de la Molécula 1 de Adhesión Intercelular y de la Molécula 1 de Adhesión Vascular-Celular en la Célula Endotelial

• AUTOR: Tatsumi H, Kitawaki J, Honjo H y colaboradores
• TITULO ORIGINAL:Lack of Stimulatory Effect of Dienogest on the Expression of Intercellular Adhesion Molecule-1 and Vascular Cell Adhesion Molecule-1 by Endothelial Cell as Compared with other Synthetic Progestins
• CITA: Maturitas 42(4):287-294, Ago 2002

 

Introducción

Distintos estudios han demostrado que la terapia de reemplazo hormonal (TRH) en mujeres premenopáusicas presenta efectos beneficiosos en la evolución de la aterosclerosis y reduce el riesgo de enfermedad coronaria en un 50%. Es bien conocido el efecto de los estrógenos sobre el aparato circulatorio; sin embargo, aún es discutible la influencia de las distintas progestinas en la aterosclerosis.

La adhesión de los monocitos circulantes al endotelio, inducida por citoquinas, es un desencadenante muy importante en el inicio de la aterosclerosis. La extravasación de los monocitos conlleva un proceso con múltiples pasos, que incluyen el reclutamiento de las células circulantes, la adhesión firme y la migración celular transendotelial. Esta adhesión intercelular requiere interacciones específicas ligando-receptor entre los receptores de adhesión de los monocitos y sus correspondientes moléculas de adhesión celular endotelial.

La adhesión de los monocitos a las células endoteliales es mediada por la molécula 1 de adhesión intercelular (ICAM-1 [intercellular adhesion molecule]) y por la molécula 1 de adhesión vascular-celular (VCAM-1 [vascular cell adhesion molecule]). Los estrógenos han demostrado disminuir de manera favorable la expresión endotelial de las moléculas de adhesión celular; no obstante, el efecto de las distintas progestinas administradas junto con los estrógenos todavía es desconocido.

El dienogest (DNG) es un esteroide sintético que forma parte del nuevo grupo de progestinas, llamadas «híbridas», que combina las propiedades farmacodinámicas de las 19-norprogestinas y de la progesterona y de los derivados de esta última. El DNG se caracteriza por su selectividad por los receptores de la progesterona (RP), sin afinidad por otros receptores esteroideos o por la globulina ligada a las hormonas sexuales, así como por su efecto antiandrogénico y por su escasa actividad sobre los diferentes parámetros metabólicos. Se utiliza en combinación con estrógenos como tratamiento anticonceptivo o como TRH debido a sus mínimos efectos adversos.

En el presente estudio, los autores analizaron el efecto del DNG sobre la expresión celular endotelial de la ICAM-1 y de la VCAM-1 inducida por la interleuquina-1beta (IL-1beta) mediante la utilización de células endoteliales venosas de cordón umbilical humano (HUVEC [human umbilical venous endothelial cells]) y lo compararon con los efectos de la progesterona y las progestinas que se utilizan como TRH y como anticonceptivos.

Métodos y materiales

Los esteroides. En el presente estudio se utilizaron los siguientes esteroides: acetato de medroxiprogesterona, acetato de noretindrona, levonorgestrel, mifepristona, hidroxiflutamida y DNG.

La extracción del ARN y la reacción en cadena de la polimerasa. La extracción y la expresión del ARNm de los RP y de los receptores de andrógenos fueron determinadas en las HUVEC por medio de la reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa reversa (PCR-TR). Se utilizaron dos sets de primers para los RP debido a que este receptor tiene dos isoformas: la PR-A y la PR-B, y se llevaron a cabo 35 ciclos de PCR a 94° C, 63º C y 72º C durante un minuto, seguido por 10 minutos a 72º C. Los productos fueron sometidos a electroforesis en un gel de agarosa al 1.5% y teñidos con bromuro de etidio.

El cultivo celular. Las células de cordón umbilical se obtuvieron de pacientes sin complicaciones endocrinológicas que tuvieron un parto normal. Estas células se transportaron al laboratorio en una solución PBS (buffer con P, sin Ca y Mg) y la suspensión celular fue colocada en placas. La pureza celular se confirmó por la morfología celular característica y por la presencia de antígeno de factor de von Willebrand. Las HUVEC fueron estimuladas con IL-1beta durante 24 horas en presencia y ausencia de los distintos esteroides mencionados.

La medición de la expresión de la ICAM-1 y de la VCAM-1 en la superficie celular por medio de ELISA. La medición semicuantitativa de la expresión en la superficie celular de la ICAM-1 y de la VCAM-1 fue realizada por medio de ELISA. Las placas que contenían las monocapas de HUVEC fueron sometidas a lavados sucesivos con PBS y otras soluciones buffers para ser incubadas a distintas temperaturas con anticuerpos monoclonales de ICAM-1 y de VCAM-1, con el complejo estreptavidina-peroxidasa de rábano picante, entre otros. La reacción se detuvo con el agregado de 1 M de ácido sulfúrico y la absorbancia se leyó a 490 nm en el lector de ELISA.

Análisis estadístico. Cada uno de los datos fue expresado como la media ± SEM de 24 determinaciones. Los datos de la ICAM-1 y de la VCAM-1 fueron manifestados como el porcentaje de control, porque los valores de control variaron entre los preparados celulares.

Resultados

La PCR-TR confirmó la expresión del ARNm de ambas isoformas de los receptores de progesterona, tanto la PR-A como la PR-B, así como la expresión del receptor de andrógenos, en todas las preparaciones que contenían las HUVEC. El agregado de 10^-10 a 10^-7 M de progesterona o de 10^-10 a 10^-8 M de DNG no modificó la expresión celular inducida por IL-1beta de la ICAM-1 y de la VCAM-1. Por el contrario, la administración de 10^-10 a 10^-8 M de acetato de medroxiprogesterona o de acetato de noretindrona y de levonorgestrel provocó aumento en la expresión de las moléculas de adhesión celular, dependiente de las dosis.

El aumento en la expresión inducido por las progestinas fue bloqueado por la administración concomitante de mifepristona, un antagonista de los RP, pero no por el agregado de hidroxiflutamida, un antagonista androgénico. La mifepristona por sí sola y la hidroxiflutamida sola no generan variaciones en la expresión en la membrana celular. Por lo tanto, los autores concluyen que la estimulación mediada por las progestinas fue realizada de manera predominante mediante el RP.

Discusión

En este estudio, los investigadores demostraron que la exposición a concentraciones fisiológicas de las progestinas sintéticas, con excepción del DNG, determina un aumento dependiente de la dosis en la expresión de la ICAM-1 y de la VCAM-1 en las células endoteliales. En oposición, la progesterona no aumenta la expresión de las moléculas de adhesión celular. Por su parte, el DNG no modifica la expresión de la ICAM-1 pero sí genera aumento en la expresión de la VCAM-1 cuando se utiliza en concentraciones elevadas.

El aumento de las moléculas de adhesión fue bloqueado por la mifepristona, un antagonista de los RP, por lo que la estimulación mediada por las progestinas fue realizada de manera predominante a través de los RP. En relación con el potencial aterogénico de las progestinas, los resultados demuestran que el DNG tendría un efecto favorable en comparación con otras progestinas sintéticas que incluyen el acetato de medroxiprogesterona, el acetato de noretindrona y el levonorgestrel en las mismas concentraciones.

El mecanismo molecular por el que las progestinas aumentan la expresión de la ICAM-1 y de la VCAM-1 no es claro, ya que no hay pruebas de que exista un elemento que responda a la progesterona en la región promotora. Una vía posible podría ser que la progestina module el factor de transcripción-kappaB que, a su vez, se une a la región promotora del gen de la VCAM-1.

La ICAM-1 y la VCAM-1 han sido identificadas en lesiones ateroscleróticas humanas y animales. En seres humanos, estas moléculas se observan con mayor prevalencia en la íntima de las placas ateroscleróticas que en la íntima de las arterias sin lesiones, y se encuentran aumentadas en las células endoteliales adyacentes a macrófagos recién reclutados. La concentración plasmática de la ICAM-1 soluble está asociada con la gravedad de la aterosclerosis coronaria y con el daño miocárdico en el infarto agudo de miocardio, mientras que los niveles plasmáticos elevados de VCAM-1 se relacionan con antecedentes de infarto de miocardio.

La TRH ha demostrado disminuir las formas solubles de las moléculas de adhesión en las mujeres posmenopáusicas. Los resultados de distintas investigaciones previas sugieren que la administración concomitante de acetato de medroxiprogesterona, pero no de progesterona, con estrógenos podría atenuar el efecto protector de los estrógenos sobre el sistema cardiovascular y el efecto favorable sobre el metabolismo de los lípidos. Otros ensayos sostienen que el DNG carece de algunos de los efectos desfavorables de las progestinas.

El presente estudio utilizó un modelo de HUVEC in vitro que expresa niveles más elevados de la ICAM-1 y de la VCAM-1 que las células endoteliales in vivo. Este modelo es similar al endotelio vascular en el desarrollo de la aterogénesis, ya que ciertas citoquinas, como la IL-1beta, estimulan la expresión endotelial de las moléculas de adhesión.

Conclusión

Los datos demuestran que el DNG no aumenta la expresión de las moléculas de adhesión celular ICAM-1 y VCAM-1 con concentraciones clínicas como otras progestinas sintéticas, que incluyen el acetato de medroxiprogesterona, el acetato de noretindrona y el levonorgestrel. Esto puede sugerir que el DNG, en términos de aterogénesis, es una progestina que ejerce un efecto favorable en comparación con otras progestinas sintéticas. El estrógeno, en combinación con el DNG como una progestina que carece de efecto desfavorable para la aterosclerosis, puede ser una opción adecuada de TRH en mujeres posmenopáusicas.

Especialidad: Bibliografía