Asociación entre Enfermedad Hepática Terminal en la Hepatitis C Crónica con Mutaciones en las Queratinas de las Células Epiteliales

• AUTOR : Strnad P, Lienau T, Tao G y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Keratin Variants Associate with Progression of Fibrosis during Chronic Hepatitis C Infection
• CITA : Hepatology 43(6):1354-1363, Jun 2006
• MICRO : Las mutaciones en las queratinas 8 y 18 producen riesgo de enfermedad hepática terminal a pesar de que no se sabe qué enfermedades están involucradas. En este trabajo se analizan estas mutaciones en los cuadros de hepatitis C crónica.

Introducción

El virus de la hepatitis C (VHC), la principal causa de hepatitis crónica en el mundo occidental y la infección crónica de transmisión sanguínea al recién nacido más frecuente, afecta a más de 120 millones de individuos en todo el mundo. Su curso clínico es variable, dado que el 4% al 22% de los pacientes crónicos puede presentar cirrosis en un plazo de 20 años de evolución, mientras que otros nunca llegan a tener fibrosis hepática avanzada. Dada esta variabilidad de su curso clínico, la eficacia limitada de la terapia actualmente disponible y la disponibilidad de tratamientos es importante mejorar el pronóstico de su progresión para tomar decisiones terapéuticas apropiadas. Varios factores ambientales y del huésped afectan negativamente el curso de la enfermedad; entre ellos, el sexo masculino, la edad avanzada al momento de adquisición de la infección, la obesidad y la infección simultánea con los virus de hepatitis B o VIH. Asimismo, variaciones en genes que codifican proteínas inmunorreguladoras, citoquinas y factores fibrogénicos actúan como modificadores importantes de la progresión de la enfermedad. Además, los polimorfismos en las proteínas del citoesqueleto de la queratina, predisponen a sus transportadores a mayor riesgo de evolución hacia la enfermedad hepática terminal; no obstante, se desconoce la asociación potencial entre las variantes de queratina con la infección por VHC y su progresión.

El citoesqueleto de las células eucarióticas consiste en microtúbulos, microfilamentos y filamentos intermedios. Estos últimos componen una gran familia de proteínas, que incluye a las queratinas en las células epiteliales, la desmina en el músculo y los neurofilamentos en las células nerviosas. La subfamilia más numerosa son las queratinas, constituidas por 20 productos genéticos únicos: el tipo I corresponde a queratina 9 a 20 (genes KRT9-KRT20, proteínas K9-K20) y el tipo II a queratina 1 a 8 (genes KRT1-KRT8, proteínas K1-K8). En los órganos digestivos, el epitelio simple expresa K8 junto con niveles variables de K7, K18, K19 y K20, lo que depende del tejido. Los hepatocitos adultos son únicos entre las células epiteliales y expresan únicamente K8 y K18, al contrario de otros epitelios glandulares -como el ductal o el intestinal- que expresan una o más queratinas adicionales. La expresión «exclusiva» de K8/K18 dispone al hígado como el órgano más sensible a la mutación o ablación de K8/K18.

En seres humanos, la mutación de 13 de las 20 queratinas conocidas causa un amplio espectro de enfermedades epidérmicas, orales y oculares. La única asociación establecida de mutaciones de la queratina con enfermedades intestinales es la de variantes de K8/K18 con enfermedad hepática terminal. Esta observación se basa en varios estudios: en uno de ellos, realizado en los EE.UU., en el que fueron evaluados 467 pacientes con enfermedad hepática de distintas etiologías, el 12.4% de la muestra presentó variantes de K8/K18, mientras que en un grupo de 365 donantes de sangre de banco se hallaron variantes en un 3.7%] (Ku y colaboradores, 2005). Por el contrario, 2 estudios europeos que incluyeron pacientes alemanes con enfermedad hepática crónica de distintas etiologías y de gravedad no especificada no refirieron variantes de K8/K18 o no confirmaron su asociación con enfermedad hepática; sin embargo, la imposibilidad de identificar estas variantes se debió a limitaciones de las condiciones experimentales, mientras que la falta de asociación de variantes de K8 se produjo probablemente por diferencias en la población evaluada, por estadificación incompleta de la enfermedad hepática en estudio o porque sólo se tomaron 2 variantes de queratina.

Pacientes y métodos

Selección de pacientes. El estudio se realizó en 336 sujetos con hepatitis C crónica (HCC) con diagnóstico confirmado por ARN-VHC positivo, a los que se les efectuó biopsia hepática entre los años 2001 y 2004. Para determinar el grado de inflamación y estadio de fibrosis se utilizó la clasificación de Ludwig, que establece 4 grados (1 a 4). Se descartaron otras causas de hepatitis crónica, como infección crónica por virus de la hepatitis B, hemocromatosis hereditaria, enfermedad hepática autoinmune y colestasis crónica.

Análisis genético. Se aisló el ADN de sangre periférica y se analizó la presencia de variaciones en K8/K18.

Análisis estadístico. Se realizó un estudio retrospectivo con análisis de la aparición de variantes de K8/K18.

Resultados

Más del 95% de los pacientes era de raza blanca, el 62% era de sexo masculino y el 21% reunía los criterios de la Organización Mundial de la Salud de consumo significativo de alcohol. La mayoría de los pacientes presentaba VHC genotipo I (74%), con inflamación leve a moderada (grado 0-2.88%) característica de la HCC, y el 37% tenía fibrosis avanzada (estadios 3 y 4). La búsqueda de variantes de queratina en las regiones que codifican K8 y K18 identificó un total de 8 variantes heterocigotas de K8 y 1 de K18, lo que llevó al cambio en un aminoácido en 24 pacientes. Dentro de estas 9 mutaciones se hallaron 8 polimorfismos nuevos que no habían sido descritos con anterioridad. De los 24 pacientes, 20 presentaron una variante única y 4, variantes dobles. Los autores las clasificaron en polimorfismos simples que no tendrían relevancia biológica (K8 163V/A319S y K18 S230T) y mutaciones descritas previamente con posible relevancia biológica (K8 T26R/Y54H/G55A/G62C/R341H/A359T). La más común fue R341H, hallada en 10 pacientes. Asimismo, se identificaron variantes en secuencias no codificantes dentro de los intrones de K8/K18 estudiados, que no presentaron asociación aparente con la gravedad de la fibrosis o la inflamación.

Los análisis mostraron una fuerte asociación de las variantes de K8/K18 exónicas con el aumento de la fibrosis (p = 0.002) y una relación no significativa con el aumento de la inflamación. La asociación con la fibrosis resultó independiente de otras variables.

Discusión

Los hallazgos más importantes de este estudio señalaron la caracterización de variantes exónicas de K8/K18 heterocigotas que alteraron aminoácidos en 24 pacientes con HCC sobre un total de 329 (7.3%) y variantes no codificantes en 26 (7.9 %), de los cuales 11 presentaban variantes exónicas; además, la identificación de 3 variantes nuevas de K8 exónicas y de 6 variantes no codificantes, y de K8 R341H como la variante K8/K18 más común en pacientes alemanes con VHC. Por último, la asociación significativa de variantes K8 exónicas con fibrosis progresiva, que se correspondió con la hipótesis de los autores que consiste en que estas variantes predisponen a lesión hepática. El número de variantes hallado puede estar subestimado debido a potenciales limitaciones de las condiciones experimentales.

Según los autores, los resultados de este estudio demuestran no sólo la asociación de variantes de queratina con una prevalencia de enfermedad hepática mayor y más específica sino también que su prevalencia y progresión se encuentran asociadas con la frecuencia de variantes de K8/K18 halladas en pacientes de los EE.UU. La estimación conservadora de los autores de mutaciones probablemente relevantes muestra una frecuencia de 10.3% en pacientes con fibrosis en estadio 4 en comparación con la prevalencia del 12.4% observado en sujetos con enfermedades hepáticas de distintas etiologías. Como en otros estudios previos, se detectó la variante heterocigota K8 L227L en el 51% de los pacientes, que es muy poco probable que tenga significación biológica, dado que se observó en todos los estadios de la fibrosis y no causó sustitución de aminoácidos.

Se hallaron diferencias en la frecuencia de las variantes respecto de estudios anteriores. Algunas de las variaciones encontradas anteriormente no se hallaron en éste (y viceversa), en especial de K18. Esto puede deberse a diferencias en la población, como el origen étnico, dado que algunas variantes se observan principalmente en pacientes norteamericanos de origen africano (el estudio incluyó sólo a 2 pacientes de este origen), a asociación de enfermedades o a diferencias en la gravedad del cuadro.

Además de las variantes identificadas merecen atención otros puntos: en primer lugar, K8 T26R y G55A fueron halladas en pacientes con fibrosis hepática estadio 4. Segundo, la variante K8 163V sólo se encontró en sujetos con fibrosis hepática grave y descrita en pacientes con enfermedad inflamatoria intestinal, y podría tener un efecto en la organización de los filamentos de queratina. El tercer punto señala la asociación exclusiva de la variante intrónica KRT8 IVS7 + 10delC con la exónica K8 R341H; esta fuerte relación sugiere la posibilidad de una asociación causal entre ambas.

El mecanismo potencial por el que las variantes de K8 y K18 pueden predisponer a lesión hepática incluye su papel como citoprotector de los hepatocitos. Las queratinas pueden servir como secuestradoras de proteínas dañadas por oxidación. Además, K8 y K18 sirven como proteínas antiapoptóticas, que se comprueba cuando estas queratinas están ausentes o mutadas. Esta función antiapoptótica puede ser muy relevante dada la importancia de la apoptosis y del estrés oxidativo en la infección por HCC. Además, la mutación de la queratina puede interferir en el ensamblaje de los filamentos de K8/K18, disminuye la solubilidad de la queratina o puede alterar su capacidad para servir como sustrato fisiológico de quinasas. La participación de KRT8/KRT18 en la enfermedad hepática los ubica dentro de los pocos riesgos genéticos bien conocidos junto con las proteínas inmunorreguladoras, como citoquinas, factores fibrogénicos y polimorfismos enzimáticos.

Especialidad: Bibliografía - Gastroenterología