Evalúan la Utilidad del Resveratrol en la Prevención del Aneurisma de Aorta Abdominal

• AUTOR : Kaneko H, Anzai T, Fukuda K y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Resveratrol Prevents the Development of Abdominal Aortic Aneurysm Through Attenuation of Inflammation, Oxidative Stress, and Neovascularization
• CITA : Atherosclerosis 217(2):350-357, Ago 2011
• MICRO : La administración de resveratrol se asoció con la reducción en diversos procesos implicados en la fisiopatogenia del aneurisma de aorta abdominal. Estos hallazgos sugieren un potencial terapéutico de este fármaco en dicha patología.

Introducción

El resveratrol (3,4′,5-trihidroxi-trans-estilbeno) es un polifenol encontrado en el vino tinto y la cáscara de la uva. Esta sustancia tiene efectos antioxidantes y antiinflamatorios que podrían contribuir a la prevención de eventos cardiovasculares. Dichos mecanismos podrían explicar la llamada «paradoja francesa», referida al hecho de que los franceses presentan una incidencia relativamente baja de enfermedad cardiovascular, a pesar de llevar una dieta rica en calorías y grasas. Además de los efectos antioxidantes y antiinflamatorios, se ha descrito que este compuesto presenta acciones antiangiogénicas y antitumorales. El resveratrol produce la activación del gen SIRT 1, el cual produce un retraso en la aparición de los efectos deletéreos del envejecimiento y simula los aspectos transcripcionales de la restricción dietaria. En modelos con animales con diabetes tipo 2 y envejecimiento, se observó que esta droga producía efectos vasoprotectores.
El aneurisma de aorta abdominal (AAA) consiste en una dilatación localizada de la aorta abdominal, más comúnmente a nivel de su segmento infrarrenal. Su prevalencia aumenta con la edad y se estima que un 9% de las personas mayores a 65 años presenta esta anomalía. De no instaurarse un tratamiento quirúrgico, el cuadro evoluciona hasta la rotura, con una elevada tasa de mortalidad. En la actualidad, no existe un tratamiento no quirúrgico eficaz para esta patología.
Investigaciones recientes han encontrado que el estrés oxidativo y la inflamación están involucrados en la patogenia del AAA. Se ha descripto una activación sinérgica entre distintos mediadores inflamatorios y el daño oxidativo, lo cual contribuye a la fisiopatogenia de esta entidad.
En el presente estudio se utilizaron animales con AAA. La enfermedad se indujo mediante la inyección periaórtica de CaCl2, el cual induce la producción de especies reactivas del oxígeno que, a su vez, dan lugar a un estado inflamatorio crónico y una degradación del tejido extracelular. A partir de este modelo, se evaluó el efecto del resveratrol sobre la aparición del AAA, centrándose en los procesos de estrés oxidativo, inflamación y neoangiogénesis.

Métodos

Inducción del aneurisma de aorta en ratones y protocolo del estudio

La inducción del AAA en los animales de estudio se logró mediante la aplicación periaórtica de 0.5M de CaCl2. El ClNa fue sustituido por CaCl2 en los ratones del grupo de tratamiento simulado (Sham/CON). Aquellos ratones que sobrevivieron al procedimiento fueron divididos de forma aleatoria en dos grupos. El primer grupo recibió tratamiento con una inyección intraperitoneal de 100 mg/kg de resveratrol, diluida en 500 microlitros de PBS (solución salina de buffer fosfato) (AAA/RSV). El otro grupo recibió inyecciones intraperitoneales de 500 microlitros de PBS (AAA/CON). La dosis usada de resveratrol se determinó según los resultados obtenidos en un estudio previo en el que se habían evaluado los efectos preventivos de la droga sobre la respuesta inflamatoria producida a partir de un cuadro de uveítis inducida por endotoxinas.
Seis semanas luego del procedimiento, se midió la presión arterial y la frecuencia cardíaca de los animales de estudio y se los sacrificó. Se extirpó la aorta abdominal y se midió su diámetro externo mediante fotografía. Además, se realizó un análisis histológico del material obtenido.

Análisis histológico

La muestra obtenida fue sometida a un análisis histológico e inmunohistoquímico con diversos tipos de tinción. Mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) se midió la expresión génica de diferentes moléculas, entre ellas, el factor de crecimiento endotelial tipo A (VEGF-A) y el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-alfa). La actividad de las metaloproteinasas (MP) tipo 2 y tipo 9 a nivel de la matriz extracelular fue evaluada mediante zimografía en gel.

Resultados

El resveratrol previno la aparición del AAA

Seis semanas luego del procedimiento inicial, se encontró que el diámetro de la aorta abdominal era mayor en el grupo AAA/CON que en al grupo Sham/CON. A su vez, se observó que dicho diámetro era menor en los ratones que habían recibido la droga en estudio, en comparación con aquellos correspondientes al grupo AAA/CON. Los valores obtenidos de presión arterial, peso corporal y frecuencia cardíaca fueron similares para los tres grupos.
El resveratrol produjo una atenuación de la inflamación y del estrés oxidativo, a la vez que preservó la estructura de la matriz extracelular. El análisis histológico demostró que el infiltrado inflamatorio de la pared arterial era menor en los ratones AAA/RSV que en el grupo AAA/CON. Se observó que la estructura ondular correspondiente a la elastina se encontraba aplanada en los animales de experimentación del conjunto AAA/CON, en comparación con los ratones del grupo Sham/CON. La administración del resveratrol contribuyó a preservar la estructura histológica de la lámina elástica y a restaurar parcialmente la estructura de la elastina. De manera similar, se observó que la estructura de colágeno de la pared arterial era más fina en el grupo AAA/CON que en los ratones Sham/CON. El tratamiento con el fármaco en estudio contribuyó a preservar la estructura de colágeno de la pared aórtica.
La tinción fluorescente con dihidroetidio, marcadora de procesos de estrés oxidativo, mostró una menor fluorescencia en los ratones tratados con resveratrol, en comparación con los del grupo AAA/CON. Los ratones del grupo Sham/CON presentaron la menor marcación con esta tinción.
El resveratrol produjo un descenso en la infiltración macrofágica, la neovascularización y el estrés oxidativo. Se llevó a cabo la tinción inmunohistoquímica del tejido arterial obtenido para los marcadores Mac-2, CD31, 8-OHdG y 4-HNE. Se encontró una infiltración de la pared arterial por macrófagos Mac-2 positivos en el grupo AAA/CON. La administración de resveratrol produjo una disminución en el recuento macrofágico Mac-2 positivo. Dicha sustancia produjo también una disminución en la cantidad de elementos vasculares CD31 positivos en el tejido periaórtico. El recuento de células positivas para 8-OHdG y 4-HNE fue mayor en los ratones AAA/CON que en los del grupo Sham/CON. La administración de la droga en estudio produjo una reducción en dicho recuento.
El resveratrol produjo una disminución en la expresión de marcadores inflamatorios y de estrés oxidativo. Mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real los investigadores evaluaron la expresión de distintos marcadores inflamatorios y del estrés oxidativo. Se encontró que éstos se hallaban elevados en los animales del grupo AAA/CON respecto de aquellos del grupo Sham/CON. El tratamiento con resveratrol produjo una disminución en la expresión de estas moléculas.
De igual modo, la terapia con resveratrol produjo una disminución en la actividad de las metaloproteinasas. Dicha actividad fue mayor en el grupo AAA/CON, en comparación con la del grupo Sham/CON. El resveratrol produjo una disminución en la expresión de las moléculas de metaloproteinasas de la matriz (MMP) MMP-2 y MMP-9.
El resveratrol produjo una disminución en la fosforilación de la molécula p65. La expresión de la proteína p65 fue similar en los tres grupos. Sin embargo, su forma fosforilada se encontraba en mayor cantidad en el grupo AAA/CON. Luego del tratamiento con la droga en estudio, se observó un descenso en la expresión de la forma fosforilada.

Discusión

En el presente estudio, se observó que el resveratrol previno la aparición del AAA secundario a la instilación de CaCl2. A su vez, esta sustancia demostró producir una atenuación en los procesos de neoangiogénesis, estrés oxidativo, inflamación crónica y degradación de la matriz extracelular de la pared arterial. Todo esto sugiere que el resveratrol tendría un potencial terapéutico en el AAA.
El incremento en los procesos de angiogénesis a nivel de la membrana adventicia arterial es uno de los componentes cardinales en la fisiopatogenia del AAA, posiblemente debido a que permitiría una mayor llegada de células inflamatorias y la instauración de un proceso inflamatorio crónico en la pared aórtica. Se observó que el tratamiento con la droga en estudio producía una disminución en la expresión del VEGF-1, un factor implicado en la angiogénesis, y el aumento de la permeabilidad vascular. La disminución en los procesos de vascularización se asocia con un descenso en la infiltración macrofágica y en la expresión de citoquinas proinflamatorias. Otro grupo de investigadores encontró que el tratamiento con resveratrol producía un descenso en la expresión de marcadores inflamatorios y en la formación de la placa aterosclerótica en ratones knock out para el gen ApoE. Se considera entonces que los efectos antiangiogénicos y antiinflamatorios de esta sustancia contribuirían a la prevención del AAA.
Otro elemento fundamental en la fisiopatogenia del AAA es el estrés oxidativo a nivel vascular. En el presente ensayo se encontró, mediante técnicas de inmunohistoquímica, que el resveratrol produce una reducción en la expresión de diversos factores asociados con el estrés oxidativo y una menor producción de ROS. El factor de transcripción NF-kappa beta es un componente de la cascada de señales proinflamatorias, sobre todo mediante la señalización por p65. Se observó que los niveles aumentados de p65 fosforilado en la pared aórtica eran reducidos por el resveratrol. Estos hallazgos son congruentes con los de varios ensayos in vitro, en los que se encontró que la droga inhibía la activación del NF-kappa beta a nivel de las células endoteliales y los adipocitos.
La inflamación y el estrés oxidativo inducen la activación de las MMP; éstas producen la degradación de la matriz extracelular arterial y contribuyen a la progresión del AAA. La pérdida de la matriz extracelular da lugar a la distensión arterial. De acuerdo con la ley de Laplace, esto provoca un aumento en la tensión de la pared arterial, lo cual favorece un incremento en la dilatación aneurismática. La principal fuente de MMP son los macrófagos. De esta manera, la reducción en la infiltración macrofágica producida por el resveratrol podría contribuir en gran parte a un descenso en la actividad de este grupo de enzimas. Por otro lado, esta droga ha sido también asociada con un efecto directo que consiste en inhibir la producción y la activación de estas enzimas. El análisis histológico del tejido arterial obtenido de los ratones sometidos a tratamiento con resveratrol demostró que la inhibición de las MMP se asocia con una preservación en la estructura ondulada de la lámina elástica y en el contenido de colágeno de la capa media de la aorta.
Con respecto a las limitaciones del presente trabajo, no se evaluaron otros regímenes de dosificación para la droga en estudio. La dosis y los tiempos de administración deberán ser analizados en el futuro en próximos trabajos. Por otro lado, el pretratamiento con resveratrol podría resultar más eficaz para la prevención del AAA.

Conclusión

El tratamiento con resveratrol en ratones previno la aparición del AAA. La administración de este compuesto se asoció con una reducción en los procesos de neovascularización, estrés oxidativo, inflamación, actividad de las MMP y degradación de la matriz extracelular. Estos hallazgos sugieren un potencial terapéutico de este fármaco en el AAA.

Ref : CARDIO, CLMED.

Especialidad: Bibliografía - Cardiología - Clínica Médica