Anticuerpos Séricos contra Helicobacter spp Enterohepático en Pacientes con Enfermedades Hepáticas Crónicas y en una Población con Elevada Prevalencia de Infección por H. pylori

• AUTOR : Vorobjova T, Nilsson I, Terjajev S y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Serum Antibodies to Enterohepatic Helicobacter spp. in Patients with Chronic Liver Diseases and in a Population with High Prevalence of H. pylori Infection
• CITA : Digestive and Liver Disease 38(3):171-176, Mar 2006
• MICRO : Los pacientes con enfermedades hepáticas crónicas presentan niveles de anticuerpos contra Helicobacter hepaticus y H. bilis significativamente superiores a los de otros grupos poblacionales, lo que sugiere un posible papel de estas especies entéricas de Helicobacter en la evolución de las enfermedades hepáticas crónicas.

Introducción

Los agentes infecciosos pueden provocar trastornos hepáticos de tipo autoinmune. Por ejemplo, las especies entéricas de Helicobacter pueden ser un factor de riesgo para enfermedades hepatobiliares crónicas, como colecistitis crónica, colangitis esclerosante primaria (CEP), cirrosis biliar primaria (CBP) y hepatocarcinoma.

Los pacientes que presentan inflamación crónica de la vía biliar pueden evolucionar a enfermedad hepatobiliar maligna, por ejemplo colangiocarcinoma. Estos pacientes pueden presentar aumento de la proliferación de células epiteliales del tracto biliar junto con la presencia de ADN de Helicobacter. A pesar de que se detectó ADN de Helicobacter por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en muestras hepáticas de pacientes con enfermedades hepáticas crónicas y hepatocarcinoma, el papel de esta bacteria en las enfermedades hepáticas de los seres humanos aún no ha podido ser probado.

Helicobacter hepaticus -la más estudiada de las especies enteropáticas de Helicobacter– ha sido aislada del hígado, muestras de ciego y de la mucosa colónica de ratones con hepatitis crónica activa. Recientemente se publicó el genoma completo de este microorganismo, que presenta gran homología con algunas especies entéricas de Campylobacter.

Por otra parte, H. bilis infecta la vesícula biliar de seres humanos y provoca colecistitis crónica. En pacientes con gastroenteritis pudo aislarse H. pullorum, que fue analizado mediante pruebas bioquímicas, hibridación de ADN y secuenciación de ARNr 16s.

La PCR ultrarrápida es un método sumamente sensible para detectar ADN de Helicobacter localizado en el tracto biliar y en el hígado. Mediante métodos serológicos pueden diagnosticarse especies no gástricas de Helicobacter, si bien esto puede tener ciertas limitaciones debido a la reactividad cruzada entre Helicobacter y Campylobacter, que son especies estrechamente relacionadas.

En pacientes con enfermedades hepáticas crónicas se comprobaron niveles elevados de anticuerpos séricos contra H. hepaticus y H. bilis. Sin embargo, poco se investigó respecto de la seroprevalencia de infecciones entéricas no gástricas por Helicobacter spp.

Por ello, los autores realizaron un estudio en la Universidad de Tartu, Estonia, para analizar los niveles séricos de anticuerpos contra 3 especies entéricas de Helicobacter en pacientes con diversas enfermedades hepatobiliares y comparar los resultados con los parámetros correspondientes a un grupo poblacional adulto con elevada prevalencia de infección por H. pylori y con dadores de sangre sanos, con el objetivo de explorar una posible asociación entre Helicobacter entérico y enfermedades hepáticas crónicas.

Materiales y métodos

En total se analizaron 329 muestras séricas pertenecientes a 90 pacientes con enfermedades hepatobiliares crónicas (38 hombres, 52 mujeres, 54.52 + 14.16 años). Dieciocho de ellos con enfermedad hepática alcohólica (4 con hepatitis y 14 con cirrosis); 12 con cirrosis hepática (4 hepatitis C, 1 hepatitis B, 2 hepatitis autoinmune y 5 de causa desconocida); 6 con hepatitis C crónica; 7 con hepatitis B crónica; 13 con CBP; 9 con hepatitis autoinmune y 25 con litiasis biliar. Una cohorte de 121 personas de una población de adultos de Estonia (52 hombres, 69 mujeres; media de edad de 52.11 + 15.19 años) con elevada prevalencia de infección por H. pylori, 50 pacientes pediátricos (18 varones, 32 niñas; media de edad de 7.46 + 3.96 años) internados por 5 días en la Clínica Pediátrica de la Universidad de Tartu con diferentes diagnósticos y 68 dadores de sangre (21 hombres, 47 mujeres; media de edad de 37.02 + 11.18 años) seleccionados al azar y negativos para los virus de la hepatitis C y B.

El suero, estudiado previamente para H. pylori, fue analizado para determinar anticuerpos de tipo IgG contra H. hepaticus, H. bilis y H. pullorum. En principio se empleó enzimoinmunoanálisis por adsorción (ELISA) para tamizaje y exclusión de casos negativos. Posteriormente, las muestras séricas positivas por ELISA fueron estudiadas por inmunotransferencia.

Para minimizar la reactividad cruzada entre H. pylori y las otras 3 especies de Helicobacter se realizó un procedimiento de absorción de anticuerpos con células lisadas de H. pylori antes de las pruebas de ELISA y de inmunotransferencia.

Resultados

Análisis de la reactividad cruzada entre las especies de Helicobacter

Las pruebas de inmunotransferencia fueron realizadas con tiras que contenían proteínas separadas de las 4 especies de Helicobacter. Con el antígeno de H. pylori, el suero preabsorbido (positivo para H. pullorum, H. bilis y H. hepaticus) mostró reactividad fuerte a moderada con las proteínas correspondientes en tamaño a las proteínas del shock térmico (HSP 60) y a la proteína CagA. Las tiras con antígenos de H. pullorum y H. bilis incubadas con suero preabsorbido positivo para las especies respectivas no mostraron reactividad cruzada entre las especies. Se observó reactividad cruzada leve con los antígenos de H. hepaticus incubados en suero preabsorbido anti-H. pullorum y anti-H. bilis. No se observó reactividad cruzada con el suero anti-H. pylori.

ELISA e inmunotransferencia

Se halló una elevada tasa de positividad con ELISA para las 3 especies de Helicobacter en todas las muestras analizadas, especialmente en relación con la muestra de la población adulta (41% a 52%), que fue significativamente superior en comparación con los demás grupos estudiados (p < 0.05). Los pacientes con enfermedades hepáticas y biliares crónicas presentaron mayor seroprevalencia contra H. bilis en comparación con los dadores de sangre (p = 0.02). De acuerdo con la prueba de ELISA, los pacientes con CBP mostraron la mayor seropositividad para Helicobacter spp biliar y una diferencia significativa en la respuesta a H. hepaticus en comparación con los pacientes con hepatitis autoinmune (6/13 en comparación con 0/9; p = 0.02). Ninguno de los 9 pacientes con hepatitis autoinmune respondió a especies biliares de Helicobacter. Los pacientes pediátricos presentaron una seroprevalencia significativamente inferior de anticuerpos de tipo IgG contra cepas de Helicobacter spp biliares y H. pylori (p < 0.01).

Cuando se empleó el método de inmunotransferencia, la reactividad de los anticuerpos contra los antígenos específicos de las especies entéricas de Helicobacter redujo el número de sueros positivos por ELISA en todos los grupos, especialmente en el grupo de población adulta (44% para H. hepaticus, 41% para H. bilis, 52% para H. pullorum por ELISA, en comparación con 5%, 8% y 14%, por inmunotransferencia, respectivamente; p < 0.0001).

El análisis visual de las tiras de inmunotransferencia mostró una elevada reactividad global con las bandas de proteínas con Mrs de 58-62 kDa, correspondientes en tamaño a HSP de Helicobacter, lo que indica resultados de ELISA no específicos. Como se considera que los anticuerpos contra HSP presentan elevada reactividad cruzada, los autores emplearon sólo los resultados de la inmunotransferencia para comparar los diferentes grupos.

Los resultados de la inmunotransferencia del suero de los pacientes con enfermedad hepática crónica mostraron una seropositividad significativamente mayor para H. hepaticus y H. bilis, en comparación con el suero de la población adulta y para H. hepaticus en comparación con los resultados de los dadores de sangre.

Ninguno de los dadores de sangre resultó positivo para H. hepaticus y H. bilis y 3/17 muestras séricas fueron positivas para H. pullorum. No se observaron diferencias significativas en la seropositividad contra las especies entéricas de Helicobacter dentro del grupo de pacientes con diversas enfermedades hepáticas crónicas de acuerdo con los resultados de la inmunotransferencia (p > 0.05). Cinco muestras séricas negativas por ELISA resultaron positivas por inmunotransferencia.

Discusión

La prueba de inmunotransferencia con la interpretación de la reactividad de anticuerpos contra antígenos específicos de las especies entéricas de Helicobacter redujo el número de muestras séricas positivas por ELISA en todos los grupos estudiados, especialmente en el grupo de población adulta. Esto indica una elevada tasa de reactividad cruzada entre las proteínas compartidas por estas especies de Helicobacter, como HSP, ureasa y proteínas flagelares. Las HSP son proteínas inmunogénicas muy conservadas, que presentaron escasa absorción por el método empleado en este estudio. Por lo tanto, deberían ser excluidas si la intención es revelar reacciones inmunes contra especies específicas.

Muchas especies de Helicobacter son difíciles de cultivar. El diagnóstico serológico de las infecciones por especies enteropáticas de Helicobacter es sencillo y rentable en comparación con las biopsias hepáticas y vesiculares para histología y PCR, que pueden estar acompañadas por un elevado riesgo de hemorragia.

Las mayores respuestas contra H. hepaticus y H. bilis en pacientes con enfermedades hepáticas crónicas en comparación con los dadores de sangre sanos y la población adulta concuerdan con los resultados de la investigación previa en que las respuestas de anticuerpos contra estas especies permanecieron altas luego del procedimiento de absorción. H. hepaticus aún no ha sido detectado en muestras humanas. La reactividad significativa contra esta especie en pacientes con enfermedad hepática podría reflejar reactividad cruzada con antígenos de otras especies de Helicobacter no analizadas en el presente estudio.

Entre los pacientes con enfermedades hepáticas crónicas, aquellos con CBP mostraron una reactividad de anticuerpos significativamente mayor contra H. hepaticus que los pacientes con hepatitis autoinmune.

Los autores sugieren una posible asociación entre las especies de Helicobacter y las enfermedades hepatobiliares crónicas en seres humanos. Sin embargo, señalan que las respuestas de anticuerpos contra estas 3 especies entéricas de Helicobacter no mostraron relaciones claras con un grupo específico de pacientes con enfermedades hepáticas crónicas, lo que podría atribuirse al pequeño número de muestras séricas estudiadas de cada grupo.

Conclusiones

La presencia de antígenos con reacción cruzada entre H. pylori y las especies entéricas de Helicobacter manifestó la dificultad de diseñar una prueba de ELISA con elevada especificidad si no se emplean proteínas específicas purificadas de las especies respectivas. Los autores sugieren que la prueba de inmunotransferencia para definir las respuestas de anticuerpos contra estas proteínas parece preferible para establecer un diagnóstico serológico de infección por estos patógenos.

Los pacientes con enfermedades hepáticas crónicas mostraron niveles de anticuerpos contra H. hepaticus y H. bilis significativamente superiores que la población adulta y de dadores de sangre sanos. Los autores señalan que este hallazgo apoya el posible papel de las especies entéricas de Helicobacter en la evolución de las enfermedades hepáticas crónicas.

Especialidad: Bibliografía - Gastroenterología