Demuestran la Concordancia entre las Mutaciones del Gen KRAS en el Carcinoma Colorrectal Primario y sus Metástasis

• AUTOR : Mariani P, Lae M, De Cremoux P y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Concordant Analysis of KRAS Status in Primary Colon Carcinoma and Matched Metastasis
• CITA : Anticancer Research 30(10):4229-4236, Oct 2010
• MICRO : Se verificó elevada concordancia entre las mutaciones del gen KRAS en el carcinoma colorrectal primario y sus metástasis, si bien se reconoce la necesidad de disponer de gran celularidad mediante macrodisección o biopsias por punción para optimizar el diagnóstico.

Introducción

Las mutaciones que activan la familia de genes KRAS se asocian con carcinogénesis y se consideran un factor predictivo de la respuesta a la terapia con anticuerpos dirigidos contra el receptor del factor de crecimiento epitelial (anti-EGFR) en los pacientes con cáncer colorrectal (CCR). En diversos estudios se ha confirmado que las mutaciones somáticas del gen KRAS en los codones 12 y 13 permiten estimar la falta de respuesta a los tratamientos con cetuximab y panitunumab en sujetos con CCR metastásico. Dado que estos medicamentos están aprobados para la terapia de la enfermedad, se requiere un análisis para determinar la existencia de mutaciones antes del tratamiento. Si bien estas pruebas de laboratorio han optimizado el uso de los anti-EGFR, los análisis de mutaciones del gen KRAS se caracterizan por elevada especificidad con baja sensibilidad. Además, la mayoría de los ensayos se efectuó en muestras obtenidas de tumores primarios, mientras que pocos estudios se aplicaron en las metástasis correspondientes.

Se destaca que, de acuerdo con la información disponible, la presencia de mutaciones en el gen BRAF se vincula con la falta de respuesta a los anti-EGFR en pacientes con CCR. La frecuencia de mutaciones de este gen varía entre el 3% y el 17%, mientras que se describen sólo en presencia de mutaciones concomitantes del gen KRAS. Se postula que la mutación V600E del gen BRAF es un biomarcador de pronóstico adverso en el CCR metastásico que debería considerarse antes de la prescripción de un anti-EGFR. Sin embargo, las mutaciones en el gen KRAS suelen investigarse en preparados obtenidos del tumor primario, mientras que la terapia se indica en individuos con CCR metastásico.

En el presente análisis se describen los resultados de un estudio de la concordancia entre la presencia de estas alteraciones genéticas en los tumores primarios y sus metástasis sincrónicas y metacrónicas.

Pacientes y métodos

Se incluyeron de forma retrospectiva 38 participantes con CCR metastásico, con una media de edad de 65 ± 12 años al momento del diagnóstico de las metástasis. Se consideraron sujetos con un estadio inicial I (n = 2), II (n = 1), III (n = 3) y IV (n = 32). Se efectuó un análisis diagnóstico del gen KRAS tanto en muestras de los tumores primarios como de las metástasis. Para aumentar la celularidad de las piezas quirúrgicas se obtuvo ADN genómico precedido por técnicas de macrodisección. Se llevó a cabo la amplificación del ADN con secuenciación directa en búsqueda de las mutaciones de los codones 12 y 13 del gen KRAS y de la mutación V600E del gen BRAF. La metodología empleada incluyó pruebas de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, cuya calidad se cotejó mediante la triplicación de las experiencias. Todos los datos reunidos se procesaron por medio de pruebas estadísticas específicas.

Resultados

Las muestras correspondientes a 38 pacientes incluyeron casos de adenocarcinoma bien diferenciado (n = 12), moderadamente diferenciado (n = 20) o reducidamente diferenciado (n = 4), pero no se dispuso de esta información para los dos preparados restantes. En la evaluación de los tumores primarios, se reconoció la presencia de mutaciones en el gen KRAS en el 54% de los casos (n = 20), mientras que el gen se encontraba en estado natural en los 18 sujetos restantes. Asimismo, en el 50% de las muestras de tumores metastásicos (n = 19) se identificaron mutaciones de este gen. En un único enfermo no se comprobó coincidencia entre los resultados del tumor primario y las metástasis, con presencia de la mutación G13D limitada a la neoplasia primitiva.

En ninguna de las muestras se detectó la mutación V600E del gen BRAF. Del mismo modo, no se reconoció una correlación entre las mutaciones del gen KRAS y el estadio o el nivel de diferenciación del tumor.

En 6 enfermos fue posible el análisis de metástasis ubicadas en diferentes órganos (5 localizaciones hepáticas, 3 metástasis ováricas, 2 localizaciones peritoneales, 2 metástasis pulmonares, una localizada en el fondo del saco de Douglas y otras 2 en ganglios linfáticos). La distribución de las mutaciones no se asoció con la ubicación de la metástasis. Se destaca que uno de los pacientes presentaba 3 tumores primarios sincrónicos adyacentes en el colon distal, 2 de los cuales correspondían a variantes reducidamente diferenciadas. La secuenciación del gen KRAS fue diferente para cada localización (G12V, G12A y una forma natural del gen), mientras que en el análisis de una metástasis hepática no se verificaron mutaciones.

En 13 casos se analizaron diferentes muestras procedentes de resecciones en bloque de piezas quirúrgicas del tumor primario, las metástasis o ambos. Los resultados del análisis de mutaciones fueron coincidentes para la neoplasia primitiva y sus metástasis, con la excepción de 2 casos en los cuales se describió la coexistencia del gen KRAS en estado natural con la presencia de mutaciones.

Discusión y conclusiones

Si bien la proteína EGFR se expresa en el 85% de las metástasis del CCR, sólo un subgrupo de pacientes afectados se beneficia con la administración de anticuerpos monoclonales anti-EGFR. La eficacia de estos fármacos se reduce en presencia de mutaciones del gen KRAS, las cuales pueden inducir activación de señales intracelulares independientes de esta vía de regulación. Las mutaciones en el codón 12 son las más frecuentes. También, en el 3% al 17% de los pacientes con CCR se describen mutaciones en el gen BRAF, el cual codifica una serina-treonina quinasa que modifica la actividad de la proteína KRAS.

En la presente casuística, la mitad de los enfermos presentaba mutaciones en el gen KRAS, lo cual se considera una proporción más elevada que la descrita en la población general de los sujetos con CCR. Esta diferencia se atribuye al sesgo provocado por el predominio de individuos con estadios avanzados de la enfermedad.

El modo habitual de realizar el análisis molecular en el CCR es la fijación en formol o parafina. Dada la necesidad de trabajar con muestras con la mayor proporción de células tumorales que resulten posibles, se aplican procedimientos de macrodisección para incrementar la celularidad del preparado. Entre los recursos para detectar las mutaciones puntuales del gen KRAS se cita la secuenciación, empleada en este análisis y considerada como el método de elección. La escasa tasa de falsos positivos puede reducirse, a su vez, con la realización de las pruebas tanto en sentido convencional como inverso y por la duplicación de los análisis mediante otra técnica. Se requiere un 20% a un 25% de células con mutaciones para la identificación de éstas.

La mayoría de los análisis publicados corresponde a determinaciones efectuadas en tumores primarios. En el presente ensayo, se demostró una correlación del 97% entre la secuenciación del gen KRAS de los tumores primitivos y sus metástasis respectivas, en coincidencia con ensayos previos.

En una publicación reciente se mencionó la posibilidad de heterogeneidades tumorales, con una mayor tasa de mutaciones del gen KRAS en el centro del tumor en comparación con las áreas periféricas. En el presente estudio, se identificó una situación similar en 2 muestras, con la recomendación de los autores de efectuar una obtención de material del área central para estudios prospectivos.

En un único enfermo con tumores sincrónicos se observaron diferencias en el gen KRAS para cada localización (2 mutaciones y una variante nativa). En la metástasis hepática correspondiente sólo se identificó la forma nativa de este gen. Estos hallazgos son similares a los descritos con anterioridad para los adenomas colónicos.

De este modo, en este estudio se confirmó la elevada concordancia entre las mutaciones del gen KRAS en el tumor primario y sus metástasis, si bien se reconoce la necesidad de disponer de gran celularidad mediante macrodisección o biopsias por punción para optimizar el diagnóstico. La heterogeneidad tumoral y las posibles diferencias en términos de las mutaciones del gen KRAS en caso de tumores sincrónicos constituyen motivos para la obtención de múltiples biopsias para incrementar la certeza y sensibilidad de estas determinaciones.

Especialidad: Bibliografía - Oncología