Demuestran que el Montelukast Inhibe la Respuesta Tardía a los Antígenos, la Eosinofilia y la Expresión de IL-5 en las Vías Aéreas

• AUTOR : Ihaku D, Cameron L, Hamid Q y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Montelukast, a Leukotriene Receptor Antagonist, Inhibits the Late Airway Response to Antigen, Airway Eosinophilia, and IL-5-Expressing Cells in Brown Norway Rats
• CITA : Journal of Allergy and Clinical Immunology 104(6):1147-1154, Dic 1999
• MICRO : Los efectos del montelukast son análogos a los observados con el uso de esteroides, como la dexametasona.

Introducción

Los autores del presente trabajo investigaron los mecanismos que participan en la inflamación pulmonar que se produce durante las crisis asmáticas. Lo más característico es la infiltración de los tejidos por eosinófilos y linfocitos T, y la síntesis de citoquinas Tc, pero en estos procesos participan múltiples mediadores, tales como la interleuquina 5 (IL-5), la eotaxina, y los leucotrienos (LT). Se sugirió que las citoquinas podrían regular la producción de LT y viceversa, pero esta hipótesis aún no está comprobada.

La metabolización del ácido araquidónico resulta en la síntesis de LT, como el LTA₄, el LTB₄ o los cisteinil-LT (cist-LT). Tanto el LTB₄ como los cist-LT se han hallado en los pulmones de pacientes asmáticos, y se demostró que estimulan la producción de moco y la contracción del músculo liso, favorecen la extravasación de elementos circulantes y contribuyen al reclutamiento de eosinófilos hacia las vías aéreas.

Para interrumpir la producción y función de los LT, se han probado diferentes estrategias. Por ejemplo, los antagonistas de los receptores de cist-LT₁ han demostrado reducir la presencia de marcadores de inflamación y aliviar los síntomas del asma, y el antagonista de LT pranlukast logró disminuir la eosinofilia pulmonar en cobayos.

Los cient&iacute;ficos decidieron realizar un ensayo para investigar la relaci&oacute;n entre los cist-LT y las citoquinas T<SUB>H2</SUB> en las v&iacute;as a&eacute;reas. Para ello estudiaron el efecto de un antagonista espec&iacute;fico de los receptores de LTD

Métodos

Los investigadores sensibilizaron ratas noruegas de entre 200 g y 300 g de peso con 1 mg de ovoalbúmina. A los 14 días de la sensibilización, los animales fueron separados en dos grupos. Al grupo experimental se le administró MK (a razón de 3 mg/kg) por vía intravenosa, mientras que el grupo control recibió solución salina. A los 30 minutos de la inyección, se expuso a las ratas a ovoalbúmina en forma de spray de 5 g/100 ml de solución durante 5 minutos. Se midió la respuesta pulmonar a partir de los 5 minutos, cada 15 minutos durante 8 horas consecutivas. La respuesta pulmonar temprana (RTe) y tardía (RTa) se relacionó con la resistencia pulmonar (Rp).

Después de las 8 horas de observación de dicha respuesta, se realizó un LBA y se obtuvieron muestras que se utilizaron para contabilizar y tipificar los granulocitos y monocitos presentes en el líquido. Finalmente, las ratas fueron sacrificadas y se tomaron muestras de los pulmones.

Los preparados pulmonares y los extendidos del LBA fueron sometidos a inmunohistoquímica (IHQ), hibridación in situ (HIS) y a la combinación de ambos procedimientos. La IHQ se hizo con el objeto de demostrar la presencia de eosinófilos mediante la detección de proteína básica mayor (PBM). La HIS se realizó para evaluar la cantidad de células que expresaban ARNm de IL-5, y la IHQ-HIS sirvió para establecer el fenotipo de dichas células.

Por último, se analizaron estadísticamente los datos obtenidos.

Resultados

Los valores basales de Rp antes del desaf&iacute;o con ovoalb&uacute;mina fueron similares en ambos grupos. La RTe fue semejante en todos los animales, sin que se hayan encontrado diferencias significativas entre el grupo experimental y el grupo control. Adem&aacute;s, todos los controles y 6 de las 7 ratas pretratadas con MK mostraron RTa al ant&iacute;geno. No obstante, los autores se&ntilde;alan que los animales del grupo experimental presentaron &aacute;reas bajo la curva significativamente inferiores que las del grupo control (4.04 cm de H<SUB>2</SUB>O/[ml · s] contra 9.83 cm de H<SUB>2</SUB>O/[ml · s]; p &lt; 0.05), lo que significa que el tratamiento con MK redujo la broncoconstricci&oacute;n luego del desaf&iacute;o con ovoalb&uacute;mina.

La cantidad total de c&eacute;lulas, de macr&oacute;fagos alveolares y de leucocitos polimorfonucleares hallados en el LBA fueron similares. Sin embargo, en los animales que recibieron MK se contabilizaron menos c&eacute;lulas mononucleares que en los controles (0.85 x 10<SUP>5</SUP> ± 0.21 contra 1.73 x 10<SUP>5</SUP> ± 0.30; p &lt; 0.05). Lo mismo sucedi&oacute; con los eosin&oacute;filos, tanto en las muestras de LBA (23.83 contra 59.83) como en las de tejido pulmonar (11.50 contra 20.50). Adem&aacute;s, en los LBA de las ratas experimentales se encontraron menos c&eacute;lulas positivas para ARNm de IL-5 (23.25 c&eacute;lulas/1 000 c&eacute;lulas contabilizadas) que en las que recibieron placebo (51.50 c&eacute;lulas/1 000 c&eacute;lulas contabilizadas), al igual que en los cortes pulmonares (6.50 contra 13.83).

Mediante la IHQ-HIS, los expertos quisieron comprobar si las diferencias descubiertas en cuanto a la expresión de ARNm de IL-5 correspondían, en realidad, a una alteración en el número de linfocitos y eosinófilos. En las muestras de LBA, se observó que las ratas pretratadas con MK tenían menor cantidad de células ARNm IL-5+/CD3+ y ARNm IL-5+/PBM+ (14.2 y 9.0 células por cada 1 000 células contabilizadas, respectivamente) que las ratas que recibieron solución salina (34.3 y 21.2 células por cada 1 000 células contabilizadas). Para estos parámetros, el valor de p fue menor de 0.01. Asimismo, la mayoría de las células positivas para ARNm de IL-5 eran CD3+ o PBM+, tanto en las ratas experimentales como en las del grupo control.

Discusión

En este trabajo se intentó probar la eficacia de un antagonista específico de los receptores de LTD<SUB>4</SUB>, el MK, con respecto al reclutamiento de eosinófilos y la expresión de IL-5 en ratas noruegas sensibilizadas y expuestas a un desafío con antígeno. Los autores entienden que éste es el primer informe que trata sobre el papel de estos mediadores con respecto a la regulación de la síntesis de citoquinas.

No se comprobaron efectos del MK sobre la RTe. Si bien se estima que los mastocitos son los principales determinantes de la magnitud de dicha respuesta (puesto que son una fuente importante de LT), la relación entre los cist-LT y la RTe parece ser variable.

Además, los autores consideran haber demostrado que el tratamiento con MK se asocia in vivo con una reducción de la RTa a los antígenos y con una disminución de la eosinofilia y del número de células que expresan ARNm de IL-5, sobre la base de las observaciones realizadas sobre tejido pulmonar y muestras de LBA. La menor magnitud de la RTa observada en este estudio coincide con los resultados de otras investigaciones realizadas, tanto en animales como en seres humanos.

Si bien se desconoce la fuente exacta de los cist-LT, es sabido que estos mediadores son ampliamente secretados en relación con la RTa. En los roedores, la síntesis de cist-LT es llevada a cabo por los macrófagos, pero no así en las personas, en quienes se postula que la fuente principal son los eosinófilos.

De manera análoga a estudios anteriores, en este trabajo el MK se relacionó con una reducción del 60% en el número de eosinófilos presentes en el líquido del LBA y de un 43% en los pulmones, al comparar los valores de las ratas del grupo experimental con los del grupo control. Los expertos destacan que esta droga no inhibió completamente la infiltración pulmonar por eosinófilos, lo que indica que existen otros mecanismos involucrados en el reclutamiento de dichas células inmunológicas, que son independientes de los cist-LT.

El pretratamiento con este antagonista de los receptores de LT se asoció con una cantidad significativamente inferior de células positivas para ARNm de IL-5, tanto en las muestras de LBA (55% menos) como en las de tejido pulmonar (53% menos), en comparación con la asignación a placebo. Los investigadores consideran posible que este efecto sea aun mayor si se incrementa el intervalo entre el pretratamiento con MK y la exposición al antígeno. Sin embargo, con los datos actuales, los expertos afirman que los resultados son significativos con un intervalo corto de 30 minutos, y que este hecho corrobora que el LTD<SUB>4</SUB> es capaz de modular la expresión del IL-5.

El MK también se relacionó con una reducción de las células CD3+ que expresaban ARNm de IL-5. Este efecto podría deberse a una inhibición de la síntesis de citoquinas, por lo tanto cabría esperar que se produjeran los mismos cambios en cuanto a la IL-3 y la IL-4, aunque dichos mediadores no fueron evaluados específicamente en este ensayo. Tampoco se puede descartar que el MK interfiera en el reclutamiento de células T. Aunque no se ha demostrado la presencia de receptores para cist-LT en estas células, hay informes que aseveran que son activadas por el LTB<SUB>4</SUB>.

En conclusión, los autores afirman haber encontrado una asociación entre el pretratamiento con MK y la reducción del número de eosinófilos y de células inflamatorias positivas para ARNm de IL-5 y la mejoría del calibre de las vías aéreas. Además, sostienen que estos efectos del MK son análogos a los observados con el uso de esteroides, como la dexametasona.

Especialidad: Bibliografía - Neumonología