Detección de Distintos Clones de Trypanosoma cruzi en Pacientes Chagásicos Crónicos

• AUTOR : Coronado X, Zulantay I, Albrecht H y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Variation in Trypanosoma cruzi Clonal Composition Detected in Blood Patients and Xenodiagnosis Triatomines: Implications in the Molecular Epidemiology of Chile
• CITA : American Journal of Tropical Medicine and Hygiene 74(6):1008-1012, Jun 2006
• MICRO : Pueden coexistir distintos clones de Trypanosoma cruzi en un paciente chagásico crónico; a su vez, estos clones no siempre pueden detectarse en los triatomíneos triatomas por los diferentes mecanismos de adaptación que tienen en cada huésped.

Introducción

La enfermedad de Chagas, producida por el Trypanosoma cruzi, está ampliamente distribuida en América Latina y es transmitida por triatomíneos conocidos como vinchucas. Al menos 10 millones de personas se encuentran expuestas al riesgo de infección. El T. cruzi presenta una estructura compleja con diversas características genéticas, moleculares, bioquímicas y biológicas dentro del huésped vertebrado. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR [polymerase chain reaction]) es eficaz en detectar los distintos genotipos y presenta una sensibilidad del 96% a 100%. Los estudios basados en isoenzimas intentan demostrar la diversidad genética del T. cruzi y lo clasifican en 3 grupos principales o zymodemos (Z1, Z2, Z3). El T. cruzi tiene ADN nuclear y del cinetoplasto y ambos contienen muchas secuencias repetidas que son apropiadas para su detección por PCR. Los aislamientos también se realizaron por medio de fragmentos de restricción (RFLP [restriction fragment lenght polymorphism]). Los parásitos que presentaban los mismos patrones de RFLP pertenecen a un schizodemo.

El objetivo de los autores consistió en determinar los diferentes clones de T. cruzi que circulan en la sangre de individuos con infección crónica y en el Triatoma infestans luego del xenodiagnóstico (XD). El presente estudio es importante porque determina la distribución de los clones de T. cruzi en los 2 huéspedes (vertebrado e invertebrado).

Materiales y métodos

Fueron evaluados 57 pacientes con infección crónica con enzimoinmunoanálisis por adsorción e inmunofluorescencia indirecta para Chagas positivo; el XD se realizó simultáneamente. Se utilizaron 2 cajas de maderas cilíndricas que contenían 7 ninfas de T. infestans no infectadas. Las heces de las vinchucas fueron examinadas microscópicamente a los 30, 60 y 90 días posteriores al contagio. Una parte de la muestra fue examinada con PCR, se realizó por triplicado de la sangre de los pacientes y las heces de los triatomíneos.

La hibridación se efectuó con la sonda universal que utiliza el ADN del cinetoplasto. También se emplearon sondas específicas de diversos clones de T. cruzi.

Resultados

Las muestras de sangre y de los triatomíneos alimentados por los pacientes fueron evaluadas por PCR y exámenes de hibridación con la sonda universal y luego con un panel de 4 sondas específicas. Los resultados positivos mostraron los 330 bp correspondientes del ADN minicircular en la PCR y en la hibridación con sonda universal. Las sondas mostraron todos los patrones posibles de hibridación. Luego, los autores analizaron: 1) los índices de infección de las muestras de sangre y de las vinchucas infectadas con cada clon de T. cruzi y 2) los índices de infección mixta en cada huésped. La mayoría de los individuos estuvieron infectados con los clones 19 y 32 o ambos; sin embargo, en los triatomíneos triatomas se encontró que los clones más prevalentes fueron el 39 y 19. El porcentaje de pacientes infectados con un solo clon fue de 26.3%, 17.5% y 8.8% para los clones 19, 32 y 39, respectivamente; no obstante, el porcentaje de los mismos clones en los triatomíneos fueron del 7.0%, 0% y 19%, en igual orden. El 45.5% de las infecciones mixtas fue detectado en la sangre y el 54.2% en los triatomíneos.

En un paciente se detectó sólo el clon 19, mientras que en las heces del triatomíneo alimentado por él se encontraron los clones 32, 39 y 43. Otro participante tuvo el clon 32 y se detectó el clon 43 en el triatomíneo correspondiente. Por último, se detectaron casos donde no se aislaron clones provenientes de pacientes y varios clones fueron identificados en los triatomíneos correspondientes y viceversa. Estos resultados muestran la importancia de analizar los resultados paralelamente en ambos huéspedes. Los autores seleccionaron cuidadosamente las 4 sondas con alto porcentaje de detección (98% en sangre y 82% en los triatomíneos). Sólo el 5% de los pacientes presentó infección por un solo clon, detectada tanto en el ser humano como en el triatomíneo, lo que sugiere que la mayoría de los pacientes se infectan con varios clones de T. cruzi.

Discusión

Los autores analizaron por primera vez la distinta distribución de los clones de T. cruzi en seres humanos y triatomíneos alimentados con la misma sangre de los sujetos infectados (XD). La frecuencia encontrada de los distintos clones en cada huésped fue diferente. Así, el T. cruzi tiene distintas adaptaciones en los huéspedes vertebrados e invertebrados.

El clon encontrado con mayor frecuencia en los seres humanos fue el 19, mientras que en los triatomíneos fue el 39. Debe destacarse que los clones 39 y 43 están muy relacionados genéticamente y mejor adaptados a los invertebrados que a los vertebrados. Los clones que no pudieron ser identificados parecieran estar más adaptados a los invertebrados que a los vertebrados.

Los estudios de genotipificación de los clones de T. cruzi son complementarios, dado que se encuentran en la sangre y en los triatomíneos. Los autores consideran que la obtención de ambas muestras (sangre y triatomíneo) presenta un perfil más completo de todos los clones existentes en un individuo con infección crónica, dado que cada clon tiene una conducta diferente en cada huésped particular. La presencia de clones específicos en los seres humanos puede explicarse por diferencias en la infectividad y el control parasitario por el sistema inmunitario de cada huésped.

Con el fin de demostrar las diferentes adaptaciones que poseen los distintos clones de T. cruzi en los distintos huéspedes, algunos investigadores evaluaron la infección biclonal de T. cruzi en T. infestans. Los resultados mostraron que la mitad de las infecciones biclonales no se pudieron detectar al final del ciclo del T. cruzi e indicaron que la mayoría de los parásitos circulantes están adaptados diferentemente a cada huésped en particular.

El número estimado de pacientes con infección crónica con clones múltiples tiene importancia epidemiológica, porque las infecciones mixtas pueden deberse a: 1) una infección por un vector que contiene una infección mixta o 2) una reinfección con un clon distinto. Según los autores, el porcentaje de infecciones mixtas observadas en este estudio fue del 45.5% y 54.2% en los pacientes y triatomíneos, respectivamente. Por último, concluyen los expertos, el genotipo que no prolifera en un huésped invertebrado tiene posibilidad hacerlo en el vertebrado luego de la transmisión.

Especialidad: Bibliografía - Clínica Médica - Infectología