Efectos del Dienogest sobre la Proliferación de Células Estromales Endometriales

• AUTOR:Fu L, Osuga Y, Taketani Y y colaboradores
• TITULO ORIGINAL: Dienogest Inhibits BrdU Uptake with G0/G1 Arrest in Cultured Endometriotic Stromal Cells
• CITA: Fertility and Sterility May 2007

 

Introducción

La endometriosis es una enfermedad altamente debilitante que consiste en la presencia de tejido endometrial viable en otros sitios diferentes del útero. Los síntomas que aparecen con mayor frecuencia son dolor e infertilidad, los cuales interfieren notablemente con la vida diaria de las mujeres que los presentan. Si bien los análogos de la hormona liberadora de gonadotrofinas (GnRH) son el tratamiento de elección, los efectos adversos relacionados con el hipoestrogenismo influyen negativamente en el cumplimiento del tratamiento.

El dienogest es un derivado sintético del 19-noresteroides con elevada actividad progestágena y antiandrogénica, pero con moderada actividad antigonadotrófica. Este fármaco reduce el volumen de las lesiones endometriales y la intensidad de los síntomas en un 80% aproximadamente. Este efecto podría deberse a la inhibición de la ovulación a nivel central. Además, se ha sugerido que tiene acción antiproliferativa en las células del tejido endometrial eutópico, aunque se desconoce si ejerce el mismo efecto sobre el tejido endometrial ectópico.

Los autores evaluaron el efecto del dienogest sobre la proliferación de las células estromales endometriales (CEE) obtenidas a partir de endometriomas ováricos.

Materiales y métodos

Obtención de muestras. El estudio abarcó 14 mujeres con diagnóstico de endometriosis, cuyo promedio de edad era de 37.6 ± 4.4 años. Todas presentaban ciclos menstruales regulares y ninguna había recibido tratamiento hormonal en los 6 meses previos a la cirugía. Las muestras para el análisis fueron obtenidas de las paredes de los endometriomas ováricos que habían sido extraídos durante la intervención quirúrgica. El material fue posteriormente colocado en medios de transporte estéril.

Aislamiento y cultivo de las CEE. Las muestras de tejido endometrial fueron divididas en partes pequeñas e incubadas en un medio enzimático a 37º C durante 2 horas. La suspensión resultante fue separada por filtración con el propósito de obtener material libre de residuos para el análisis. Las CEE se aislaron por centrifugación, se incubaron nuevamente en el medio enzimático y se colocaron en recipientes a 37º C durante 30 minutos. Después, se introdujeron en un medio de cultivo enriquecido con suero bovino fetal al 10% y antibióticos.

Una vez que se logró la confluencia de las células, éstas fueron transferidas a otros recipientes con suero bovino fetal al 10%. Luego de 48 horas de permanecer en este medio, se las conservó sin suero bovino fetal durante 24 horas hasta el momento del examen, en el que se las introdujo en un medio que contenía dicho compuesto al 1.5%.

Incorporación de nucleótidos marcados. El efecto del dienogest sobre la proliferación de las CEE se evaluó por medio de la incorporación de bromodesoxiuridina (BrdU) en el material genético celular. Las CEE conservadas sin suero bovino fetal durante 24 horas fueron introducidas en medios con este compuesto al 1.5%, con el agregado de dienogest o de un excipiente, y se cultivaron durante otras 24 o 48 horas. A continuación, se incorporó una solución que contenía BrdU.

Los complejos formados por el ADN celular y la BrdU, así como los anticuerpos anti-BrdU marcados con peroxidasa, fueron detectados por la subsiguiente reacción enzima-sustrato y el resultado fue interpretado por espectrofotometría a 450 nm.

Citometría de flujo. Luego de ser cultivadas durante 24 o 48 horas en medios con suero bovino fetal al 1.5% y dienogest 10^-6 M o un excipiente, las CEE fueron puestas en contacto con una solución compuesta por tripsina y ácido etilendiaminotetracético; las muestras se lavaron con solución salina y se fijaron con etanol. Al día siguiente, se incubaron en una solución con ribonucleasa, se tiñeron con yoduro de propidio y fueron analizadas por citometría de flujo.

Análisis estadístico. Los datos fueron analizados por medio de la prueba t de Student para el análisis de los ciclos celulares, y por medio de ANOVA con prueba post hoc para el análisis de la captación de BrdU. Un valor de p menor de 0.05 fue considerado estadísticamente significativo.

Resultados

Efectos del dienogest sobre la proliferación celular

A una concentración de 10^-7 M y de 10^-6 M, el dienogest produjo una notable inhibición de la incorporación de BrdU en el ADN celular a las 24 y 48 horas del tratamiento.

Efectos del dienogest sobre el ciclo celular

A una concentración de 10^-6 M, el dienogest aumentó el número de células en fase G₀/G₁ y redujo el número de células en fase S y G₂/M a las 24 y 48 horas del tratamiento.

Discusión

Sobre la base de los hallazgos de este estudio, los autores concluyen que el dienogest inhibe la proliferación de CEE in vitro, además de suprimir el crecimiento de las lesiones endometriales en forma directa. El efecto inhibitorio fue significativo a una concentración sérica de 10^-7 M, tal como fue documentado en células estromales eutópicas. Algunos autores informaron que la concentración máxima de dienogest se alcanza dentro de las 2 horas posteriores a la administración, con valores promedio de 0.9 x 10^-7 M, 1.7 x 10^-7 M, 3.2 x 10^-7 M y 6.8 x 10^-7 M en dosis de 1 mg, 2 mg, 4 mg y 8 mg, respectivamente.

El efecto antiproliferativo del dienogest en las CEE parece deberse a la detención del ciclo celular en fase G₀/G₁, en forma similar a lo que ocurre cuando se administran progestágenos.Por lo tanto, podría inferirse que la inhibición de la proliferación de células estromales eutópicas se produce por el mismo mecanismo.

Los expertos afirman que, con excepción del efecto antiproliferativo demostrado en este estudio, hasta el momento no se han descrito otras acciones directas del dienogest sobre las CEE. Existen informes de que este compuesto reduce la síntesis de interleuquina-8 inducida por el factor de necrosis tumoral alfa. Sin embargo, los autores opinan que se requieren estudios adicionales para confirmar este hallazgo.

En síntesis, el dienogest se perfila como una alternativa promisoria para el tratamiento de la endometriosis.

Especialidad: Bibliografía