Evalúan el Efecto de la Tibolona sobre la Invasión de Células de Cáncer de Mama in Vitro

• AUTOR : Vanhoecke B, Bracke M, Kloosterboer H, Dpypere H
• TITULO ORIGINAL : Tibolone and its Metabolites Inhibit Invasion of Human Mammary Carcinoma Cells in Vitro
• CITA : Maturitas 54(3):229-237, Jun 2006
• MICRO : La tibolona y su metabolito 3 beta-OH tibolona inhiben la invasión de células de cáncer de mama in vitro. El efecto no es atribuible a modificaciones en la motilidad o en la adhesión intercelular pero obedecería a la menor liberación de pro-metaloproteinasa 9 en el medio de cultivo.

Introducción

«La invasión es el hallazgo patognomónico de los tumores malignos; el proceso se asocia con destrucción local del tejido normal adyacente y participa en la aparición de metástasis a distancia.» En la mayoría de los pacientes con cáncer, esta última complicación es la causa de fallecimiento. El fenómeno de la invasión es consecuencia del desequilibrio entre factores proinvasivos y antiinvasivos. El sistema de la E-caderina/catenina es el principal supresor de invasión en células epiteliales, mientras que entre los factores promotores de invasión se destacan la secreción de enzimas líticas que degradan la matriz extracelular y la mayor movilidad de las células del tumor. Además, diversos factores del huésped y del tumor tienen una participación esencial, dado que modulan la interacción entre las células normales y las malignas.

La terapia de reemplazo hormonal (TRH) se indica esencialmente para aliviar los síntomas climatéricos, presentes en aproximadamente el 60% de las mujeres posmenopáusicas. La tibolona es un compuesto sintético eficaz en este contexto, se la administra por vía oral, después de lo cual es transformada fundamentalmente a 3alfa y 3beta -OH-tibolona que sólo se unen a los receptores de estrógenos. Un tercer metabolito, menos abundante, se une a los receptores de progesterona y de andrógenos. El efecto estrogénico de tibolona se manifiesta en cerebro, vagina y sistema óseo pero no induce estimulación de mama ni de endometrio. Por lo tanto, el fármaco se considera un regulador selectivo de la actividad tisular estrogénica.

Sin embargo, el Million Women Study (MWS) comunicó recientemente que, en comparación con las pacientes no tratadas con TRH, el riesgo de cáncer de endometrio era menor en las que recibían tratamiento continuo con preparados con estrógenos y progestinas y mayor en aquellas tratadas con tibolona o estrógenos solos. En este estudio, por lo tanto, el uso de tibolona se asoció con mayor riesgo de cáncer de endometrio. En hueso, la droga evita la osteoporosis y, tal vez, las fracturas osteoporóticas. Aunque los beneficios en términos de mejoría de las manifestaciones climatéricas son indudables, el efecto de la tibolona sobre el inicio de un proceso maligno en mama y de la invasión del mismo no se conoce con exactitud. En este artículo, los autores analizaron la acción de la tibolona sobre la invasión de células de carcinoma de mama.

Materiales y métodos

Se trabajó con líneas celulares de adenocarcinoma mamario MCF-7/6; MCF-7/AZ y T47-D, mantenidas en los medios apropiados. También se evaluó la línea fibroblástica DHD-FIB. Se realizaron estudios de invasión en fragmentos de corazón embrionario de pollo y en gel de colágeno tipo I (principal componente de la matriz extracelular; ensayos de agregación lenta y rápida, estudios de migración y zimografía).

Los autores señalan que la migración direccional es un prerrequisito para que las células tumorales puedan invadir. Esta capacidad se determinó con agregados de células MCF-7/AZ en cultivos con colágeno tipo I. Todos los experimentos se efectuaron en ausencia y en presencia de tibolona y sus metabolitos.

Resultados

Efectos de la tibolona y sus metabolitos sobre la invasión de células de cáncer de mama humano

En el ensayo de invasión con corazón de pollo, las células MCF-7/6 tratadas con solvente invadieron en forma espontánea el tejido cardíaco. Durante 8 días se evaluó el efecto del fármaco y de sus metabolitos. En los cultivos tratados con tibolona 100 µM, 3alfa-OH tibolona, 3beta-OH tibolona y Δ4 tibolona se inhibió por completo la invasión de MCF-7/6. La tibolona, en concentración de 10 µM, no fue eficaz. El estudio inmunohistoquímico con 5D10, un anticuerpo específico contra células MCF-7, confirmó que las células no tratadas con ningún compuesto habían invadido el tejido, a diferencia de aquellas tratadas con solvente. Además, en las células tratadas se observó un efecto selectivo de la droga: se observó picnosis nuclear en las células MCF-7/6 pero no en las células cardíacas.

En la prueba de invasión en colágeno, las células T47-D invadieron intensamente el gel de colágeno, mientras que las células MCF-7/AZ no mostraron invasión y, por lo tanto, constituyeron el control negativo. El control positivo estuvo representado por las células fibroblásticas DFD-FIB, con elevada capacidad de invasión. La tibolona en concentración de 100 µM y 3beta -OH tibolona ejercieron un fuerte efecto antiinvasivo después de 24 horas de cultivo. Los otros 2 metabolitos no tuvieron efecto. No se registró toxicidad (a juzgar por los resultados con la coloración con azul de tripano) después de 24 horas de incubación.

En conclusión, los experimentos confirman que tibolona y 3beta-OH tibolona inhiben la invasión de por lo menos 2 líneas de cáncer de mama humano en ensayos de invasión in vitro.

La tibolona y sus metabolitos no estimulan la adhesión celular de células de cáncer de mama humano in vitro

En los ensayos de agregación lenta se formaron numerosos agregados pequeños e irregulares cuando las MCF-7/6 se cultivaron en ausencia de tratamiento. En presencia de 100 µM de tibolona y de sus metabolitos, el patrón de agregación no se modificó; es decir, no se produjo estimulación de agregación de las células MCF-7/6.

En los ensayos de agregación rápida, las células fueron tratadas con tripsina en condiciones de preservación de la E-caderina, para permitir la adhesión intercelular mediada por esta molécula. En presencia de calcio, el diámetro promedio de las partículas no fue distinto al observado en células tratadas con solvente. En resumen, la tibolona y sus metabolitos no indujeron adhesión intercelular de las células de cáncer humano in vitro.

La tibolona y sus metabolitos no afectan la migración de las células malignas in vitro

En el ensayo se utilizaron células MCF-7/AZ. La tibolona y sus metabolitos no inhibieron la migración de las células en geles de colágeno tipo I.

La tibolona y sus metabolitos inhiben la liberación de prometaloproteinasa (MMP) 9 de células de cáncer de mama in vitro

Los autores señalan que la invasión de células neoplásicas en la matriz extracelular requiere la actividad de MMP. Se efectuó evaluación zimográfica en sobrenadantes de cultivos de MCF-7/6 tratados con 10 µM de tibolona, sus metabolitos o solvente. No se observaron diferencias en la actividad gelatinasa pro-MMP-2 después del tratamiento con tibolona o sus metabolitos en comparación con lo que sucedió en cultivos con solvente. Por el contrario, la liberación de pro-MMP-9 estuvo reducida en sobrenadantes de células tratadas con tibolona, 3alfa-OH tibolona y Δ4 tibolona; por su parte, 3beta-OH tibolona no tuvo efecto sobre la liberación de pro-MMP-9. Los resultados se confirmaron con densitometría.

Discusión

El estudio MWS comprobó que el uso de tibolona se asociaría con un alto riesgo de cáncer de mama en comparación con las mujeres que nunca recibieron o que fueron tratadas en el pasado con TRH y con aquellas que sólo reciben estrógenos. Sin embargo, los resultados no son iguales a los observados en otras investigaciones, que refirieron una menor incidencia de cáncer de mama entre las pacientes tratadas con tibolona, respecto de las asignadas a placebo. Además, en el grupo de tibolona no se observaron parámetros asociados con mayor riesgo de cáncer de mama, como aumento de la densidad de la glándula y mastalgia.

En este trabajo, mediante la aplicación del ensayo de invasión con corazón de pollo que permite el enfrentamiento tridimensional de las células (cardíacas, fibroblastos, endoteliales y de la matriz extracelular) a las que las células del cáncer de mama se adhieren e invaden, se confirmó que después de 8 días de cultivo mixto, las células malignas realmente invadieron el tejido cardíaco de los cultivos sin tratamiento. En cambio, en los cultivos tratados con tibolona o con sus metabolitos no se produjo invasión de células neoplásicas; además, las células tumorales presentaron indicios de mortalidad, por ejemplo aumento de la picnosis.

Otro ensayo de invasión, destinado a evaluar el tipo celular y la especificidad del efecto antiinvasivo -ensayo en colágeno tipo I- reveló que la tibolona y la 3beta -OH-tibolona inhibieron la invasión de la línea T47-D. En un paso posterior se analizó el mecanismo de acción de la droga y de sus metabolitos mediante el estudio de la adhesión intercelular. Para ello se utilizaron células de cáncer de mama MCF-7/6 que expresan mal el complejo E-caderina/catenina. Como consecuencia, estas células se agregan poco en los ensayos de agregación y forman numerosos agregados pequeños en los cultivos no tratados. En las células MCF-7/6 en suspensión no se observó mayor agregación; en los estudios de motilidad tampoco se registró un efecto sustancial de la tibolona o de sus metabolitos. Por lo tanto, se analizó un mecanismo alternativo que se asocia con la degradación de la matriz extracelular. Así, en el ensayo de zimografía, las células cancerosas tratadas durante 48 horas con tibolona o con sus metabolitos liberaron menos pro-MMP-9; en cambio, la liberación de MMP-2 no estuvo afectada. Debe destacarse que el metabolito sulfatado y el metabolito 3beta-OH tibolona, que inhibieron la invasión de células MCF-7/6 en corazón de pollo, no se asociaron con reducción de la liberación de MMP-9. Durante la invasión tumoral y el proceso metastático se produce degradación de la matriz extracelular y disolución del epitelio y de la membrana basal del endotelio; en ambos procesos se han involucrado a las MMP. Los estudios futuros deberán tratar de esclarecer los mecanismos responsables de los efectos antiinvasivos y proapoptóticos de este fármaco, concluyen los autores.

Especialidad: Bibliografía - Ginecología