Evalúan Nuevos Métodos de Cultivo para el Diagnóstico Rápido de Tuberculosis

• AUTOR : Robledo J, Mejía G, Morcillo N y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Evaluation of a Rapid Culture Method for Tuberculosis Diagnosis: A Latin American Multi-Center Study
• CITA : International Journal of Tuberculosis and Lung Disease 10(6):613-619, Jun 2006
• MICRO : Los nuevos métodos de cultivo pueden reducir los tiempos en el diagnóstico y facilitar el tratamiento de pacientes con tuberculosis no bacilíferos.

Introducción

La tuberculosis (TBC) aún es una enfermedad potencialmente mortal en los países en vías de desarrollo. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha establecido ciertas estrategias para controlarla; entre ellas, la identificación y ubicación del 70% de los pacientes con baciloscopia positiva en un programa de terapia directa observada (DOTS). La baciloscopia tiene baja sensibilidad en las formas paucibacilares pulmonares y extrapulmonares. El cultivo, además de ser más sensible que la baciloscopia, permite reconocer la especie y obtener el antibiograma, pero se necesitan de 3 a 4 semanas para la identificación bacteriana. Los métodos de diagnóstico nuevos, utilizados en los países desarrollados, emplean radioactividad o fluorescencia como indicadores de crecimiento bacteriano (BACTEC). Además, existen medios de cultivos novedosos y económicos que pueden disminuir el tiempo hasta el diagnóstico y mantener la sensibilidad y especificidad de los métodos convencionales. Dos de ellos utilizan la microscopia para la detección temprana de las micobacterias: el método MODS (microscopic observation broth drug susceptibility) emplea el medio líquido, mientras que el TLA (thin-layer agar), el medio sólido; con ambos se detecta el crecimiento bacteriano aproximadamente dentro de los 10 días.

Los autores llevaron a cabo un estudio multicéntrico de fase II en varios países de Latinoamérica para evaluar la eficacia del TLA en el diagnóstico rutinario de TBC.

Materiales y métodos

Se contó con la participación de 6 laboratorios de referencia y un laboratorio coordinador que envió los reactivos, analizó y recibió los resultados. Las muestras de los pacientes con posible diagnóstico de TBC fueron reunidas en forma prospectiva en cada centro. Todos los laboratorios siguieron el mismo protocolo de descontaminación y la centrifugación de las muestras respiratorias y no respiratorias. Parte del centrifugado fue teñido con Ziehl-Neelsen e interpretado de acuerdo con las recomendaciones de la OMS. Las muestras fueron sembradas en los medios de Löwestein-Jensen (LJ) y TLA de acuerdo con las normas internacionales. Las placas de TLA y de LJ fueron selladas e incubadas a 36º C; las primeras con CO2 y las segundas sin éléste. El laboratorio coordinador distribuyó los medios TLA, que debían utilizarse dentro del mes para reducir el riesgo de contaminación. Los cultivos de LJ fueron revisados semanalmente durante 8 semanas y las placas de TLA, 2 veces por semana con un microscopio convencional a una magnificación de 100 x durante 6 semanas. La identificación de las colonias de M. tuberculosis se realizó de acuerdo con la morfología y todo el personal del laboratorio recibió instrucción práctica para ello. La identificación final de las muestras se efectuó respecto de las recomendaciones habituales. Se consideró TBC confirmada cuando el cultivo del paciente fuese positivo con cualquiera de los medios. Además, se calcularon los índices de probabilidad y sensibilidad, el tiempo hasta la detección del crecimiento y el índice de contaminación en ambos medios.

Resultados

Fueron evaluadas 1 118 muestras clínicas de pacientes con diagnóstico presuntivo de TBC. Todas aquellas que tuvieron baciloscopia positiva también cultivaron M. tuberculosis en cualquiera de los medios. Ninguna muestra extrapulmonar mostró baciloscopia positiva; sin embargo, TLA y LJ detectaron M. tuberculosis en el 7.45% y 5.49% de estas muestras, respectivamente.

De las muestras con baciloscopia negativa, el método LJ detectó 3.2% y TLA, 4.4% de M. tuberculosis. La sensibilidad fue del 84.7% y 92.6%, respectivamente. Los índices de probabilidad positiva y negativa fueron similares en ambos. Se observó bajo índice de contaminación en los 2 medios de cultivos pero fue mayor para TLA (5.1% vs. 3.0%).

El tiempo hasta la detección de M. tuberculosis presentó diferencias significativas entre ambos medios de cultivo: las muestras con baciloscopia negativa tuvieron una mediana de 11.5 días para TLA y de 30.5 días para LJ. La carga bacilar de las muestras estuvo inversamente relacionada con el tiempo hasta la detección de M. tuberculosis.

Discusión

El diagnóstico microbiológico de la TBC aún es uno de los elementos fundamentales en el control de la enfermedad. La baciloscopia es primordial en la detección de bacilos ácido alcohol resistentes, dado que es un método rápido, económico y de empleo frecuente en los países en vías de desarrollo, donde la TBC es un gran problema de salud pública. Sin embargo, debido a la baja sensibilidad, en especial en pacientes paucibacilares, se investigan, desarrollan y evalúan nuevos métodos de diagnóstico.

El presente estudio se realizó en 6 laboratorios diferentes de América Latina y demostró que el método TLA es de fácil implementación en los laboratorios que utilizan técnicas de cultivo convencionales para el diagnóstico, además de positivizarse rápidamente. Asimismo, este método detecta crecimiento bacteriano 19 días antes que el LJ en las muestras con baciloscopia negativa y 21 días antes en aquellas con baciloscopia positiva. En este trabajo, los autores hallaron resultados similares o superiores que los publicados para Bactec 460 y Bactec MGIT 960, entre otros.

El método MODS es similar al TLA: ambos son de bajo costo, no comerciales y fáciles de implementar en laboratorios diagnósticos de TBC. Además, los 2 utilizan el examen microscópico en la identificación y detección temprana del crecimiento bacteriano. Sin embargo, el TLA no necesita del microscopio invertido para observar las microcolonias, tampoco utiliza medios líquidos con riesgo biológico. La limitación de ambos reside en la disponibilidad de tiempo para la observación de los cultivos, que podría restringir su uso en los laboratorios que procesan pocas muestras. La sensibilidad obtenida con TLA fue mayor que con el medio de LJ, aunque las diferencias no fueron significativas; de todas formas, este resultado se diferencia de otros trabajos que informan una sensibilidad menor del primer método. Según los autores, las diferencias encontradas pueden deberse al bajo índice de contaminación de las placas por el uso de anfotericina B, y al menor tamaño de las placas de cultivo.

La demora en el diagnóstico de la TBC prolonga los períodos de ineficacia y progresión de la enfermedad junto con aumento en la transmisión y en la morbimortalidad. Se ha documentado una tasa de transmisión de TBC en pacientes con baciloscopia negativa de hasta el 17%; por lo tanto, el cultivo es importante en el diagnóstico y tratamiento precoz de estos pacientes paucibacilares o con TBC extrapulmonar. En el presente estudio, los expertos detectaron M. tuberculosis en 3.2% de las muestras en LJ y en 4.4% de TLA de pacientes que tuvieron baciloscopia negativa. Debido al número reducido de micobacterias no tuberculosas halladas en la investigación no fue posible evaluar el desempeño de TLA para diferenciar microscópicamente microcolonias tuberculosas de las no tuberculosas. Todos los laboratorios participantes admitieron haber podido responder precozmente a los pedidos de los médicos respecto del crecimiento bacteriano.

Los datos presentados por los autores demuestran que TLA es un método de fácil implementación, que no requiere equipos especiales y presenta la misma sensibilidad en detectar M. tuberculosis que los métodos convencionales. Por lo tanto, concluyen los expertos, debería considerárselo una alternativa económica o complementaria en los laboratorios que desean reducir el tiempo de detección de M. tuberculosis.

Especialidad: Bibliografía - Gastroenterología - Infectología