Identifican un Nuevo Marcador en Orina que Podría Ser Útil para el Diagnóstico de la Endometriosis

• AUTOR : Tokushige N, Markham R, Fraser I
• TITULO ORIGINAL : Discovery of a Novel Biomarker in the Urine in Women with Endometriosis
• CITA : Fertility and Sterility 95(1):46-49, Ene 2011
• MICRO : Mediante análisis proteómico, espectrometría de masa e inmunoelectrotransferencia se comprobó un aumento significativo de la expresión de citoqueratina 19 en la orina de mujeres con endometriosis. De confirmarse los hallazgos, este nuevo marcador podría revolucionar el abordaje diagnóstico y terapéutico de estas enfermas.

Introducción

La presencia extrauterina de glándulas y estroma similar al endometrio define a la endometriosis; las localizaciones más frecuentes de la endometriosis incluyen el peritoneo pelviano, el intestino, la vejiga, los ligamentos uterosacros y los ovarios. Aunque la sintomatología de la endometriosis es muy variable, el dolor –dismenorrea, dispareunia y dolor intestinal y abdominal– es una manifestación característica. Algunas pacientes también presentan infertilidad. Ninguno de los marcadores evaluados hasta ahora ha sido exitoso y aún hoy la cirugía endoscópica representa la metodología diagnóstica estándar. Recientemente, los autores mostraron que la detección de fibras nerviosas en las muestras endometriales se asocia con una utilidad diagnóstica semejante a la de la laparoscopia. El procedimiento, sin embargo, es invasivo, de modo tal que se requiere identificar con urgencia otros indicadores de la enfermedad que puedan evaluarse en forma sencilla. Es posible que algunas proteínas se eliminen por orina en las pacientes con endometriosis; el patrón de dichas proteínas podría ser de ayuda diagnóstica. En el presente estudio se evaluaron muestras de orina de enfermas con endometriosis confirmada por laparoscopia (n = 11) y de mujeres sin la enfermedad (n = 6) mediante procedimientos proteómicos e inmunoelectrotransferencia (Western blot).

Pacientes y métodos

La edad promedio de los casos fue de 32.8 años; todas las enfermas tenían endometriosis confirmada por laparoscopia y en el estudio anatomopatológico de las muestras obtenidas mediante histeroscopia. Los controles fueron pacientes sin indicios histológicos o laparoscópicos de endometriosis (las lesiones endometriales no mostraban estroma ni glándulas) evaluadas por infertilidad; la edad promedio fue de 38.6 años. Las muestras de orina se obtuvieron en diferentes momentos del ciclo menstrual: fase proliferativa (n = 6 y n = 3) y fase secretoria (n = 5 y n = 3) en los casos y controles, respectivamente. Ninguna participante había recibido tratamiento médico durante tres meses como mínimo antes de la cirugía.

Las pacientes con endometriosis referían dolor pelviano, dolor abdominal o infertilidad; la endometriosis se clasificó en grados I a IV según los criterios recomendados por la American Society for Reproductive Medicine (ASRM).

El análisis proteómico se llevó a cabo con un panel completo de inhibidores de proteasas, agregados a las muestras de orina, inmediatamente después de su recolección. Las proteínas se precipitaron con acetonitrilo en dos oportunidades. La concentración proteica se determinó con el método de Bradford. Posteriormente se efectuó electroforesis en gel de poliacrilamida; las proteínas se fijaron y analizaron con el sistema Progenesis Discovery con la finalidad de identificar diferencias en la expresión proteica entre los casos y los controles. Se realizó espectrometría de masa y Western blot.

Resultados

Los geles de proteínas urinarias precipitadas con acetonitrilo revelaron, en promedio, 917 «manchas» en el espectro de pH 4.0 a 7.0. Se observaron algunas variaciones en el patrón de separación proteica y en la intensidad de las «manchas» entre los casos y controles; 133 de ellas difirieron estadísticamente entre ambos grupos. Diez de las 133 «manchas» se expresaron más de dos veces, en tanto que unas 60 estuvieron francamente disminuidas en las pacientes con endometriosis, respecto de los controles. Cinco de las 10 «manchas» con expresión aumentada presentaron una diferencia aun más importante, casi 12 veces mayor. En todas ellas, la espectrometría de masa (matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry [MALFI-TOF-MS]) reveló citoqueratina-19 (CK-19), con diferentes isoformas. No se registraron diferencias en la expresión proteica en relación con la fase del ciclo menstrual.

El Western blot con anticuerpos anti-CK-19 confirmó la expresión de la proteína en 11 de 17 muestras provenientes de pacientes con endometriosis en tanto que las seis muestras estudiadas de enfermas sin endometriosis fueron negativas. La intensidad de la expresión no se correlacionó con la gravedad de los síntomas ni con la magnitud de la enfermedad.

Discusión

Los hallazgos del presente estudio muestran un patrón particular de expresión proteica en las muestras de orina de las mujeres con endometriosis, caracterizado por la alta expresión de la proteína CK-19. De confirmarse estas observaciones, añaden los autores, el procedimiento propuesto en esta ocasión podría revolucionar el diagnóstico y el abordaje de las pacientes con endometriosis.

La endometriosis es una causa frecuente de infertilidad y de dolor pelviano y ocasiona un deterioro significativo de la calidad de vida. En las mujeres en edad reproductiva, la prevalencia estimada de la enfermedad es de 10% a 15%; no obstante la cifra no es exacta, precisamente por las dificultades para establecer el diagnóstico correcto por la falta de métodos confiables, no invasivos. Diversos estudios realizados en el Reino Unido y en los Estados Unidos demostraron que el diagnóstico suele retrasarse alrededor de 8 años en promedio; como consecuencia, la enfermedad suele detectarse cuando los síntomas clásicos comprometen sustancialmente la calidad de vida de las enfermas.

Aunque en estudios previos se sugirió la utilidad de diversos marcadores séricos, ninguno de ellos ha sido útil en la práctica. Por ejemplo, el incremento de la concentración del CA-125 se asocia con sensibilidad y especificidad del 27% y 97% en la predicción de la enfermedad, de manera tal que no se de ayuda para detectar la endometriosis leve. Por su parte, la valoración de la expresión del ARN mensajero del receptor de quimioquina CCR1 tiene sensibilidad del 90% y especificidad del 74% en tanto que los niveles de la interleuquina 6 (cuando se aplica un umbral de 1.9 pg/ml) se asocian con sensibilidad y especificidad de 71% y 66%, respectivamente. La combinación del ARN mensajero de CCR1, de la proteína quimiotáctica de los monocitos (MCP-1) y del CA-125 tiene sensibilidad de 92.2% y especificidad de 81.6%. Aun así, destacan los expertos, en la práctica ninguna de estas pruebas serológicas ha sido exitosa.

Los autores, por su parte, han evaluado la utilidad de la identificación de fibras nerviosas en las muestras endometriales; el estudio se asoció con sensibilidad de 98% y especificidad de 83% y otro grupo sugirió que el análisis combinado del marcador neuronal PGP9.5, del péptido intestinal vasoactivo y de la sustancia P podría ser de ayuda para la predicción de enfermedad mínima, con sensibilidad de 95%, especificidad de 100% y precisión diagnóstica de 97.5%. No obstante, cualquiera de los procedimientos mencionados es mínimamente invasivo y el estudio inmunohistoquímico merece consideraciones especiales.

Las citoqueratinas (CK) se clasifican en CK de tipo 1 (CK 9 a 20) con peso molecular de 40 a 56 kD y de tipo II (CK 1 a 8) con peso molecular de 53 a 67 kD. La CK-19 es una proteína estructural de las células; tiene el peso molecular más bajo de todas las CK (40 kD) y se expresa en la mayoría de las células epiteliales y en muchas células malignas.

La función de la CK-19 en la endometriosis no se conoce; en dos estudios anteriores se encontró expresión homogénea de CK-19 en las células epiteliales del endometrio de mujeres con endometriosis y sin la enfermedad como también en las lesiones endometriales. Si bien la CK-19 también se detecta en el fluido menstrual y peritoneal, en el peritoneo normal y en los focos ectópicos de endometriosis, todavía no se sabe cómo ni por qué la proteína se elimina específicamente por orina. Aunque sin duda se requiere mayor investigación para comprender estos aspectos, los resultados preliminares sugieren que la búsqueda de la proteína en orina podría ser de mucha utilidad para el diagnóstico de la endometriosis.

La detección temprana de la enfermedad es esencial para adoptar las medidas terapéuticas apropiadas y evitar, así, su progresión. Además, la posibilidad de disponer de un marcador confiable que puede evaluarse en forma no invasiva indudablemente permitirá conocer mejor la verdadera prevalencia de la enfermedad y la historia natural en diferentes grupos de riesgo y en la población general, con beneficios indudables para las enfermas y para los sistemas de salud, concluyen los expertos.

Ref : GIENCO.

Especialidad: Bibliografía - Ginecología