Importancia del Transportador de Prostaglandinas en el Proceso de Decidualización

• AUTOR : Kang J, Chapdelaine P, Laberge P, Fortier M
• TITULO ORIGINAL : Functional Characterization of Prostaglandin Transporter and Terminal Prostaglandin Synthases during Decidualization of Human Endometrial Stromal Cells
• CITA : Human Reproduction 21(3):592-599, Mar 2006
• MICRO : Evaluación de la expresión y la función del transportador de prostaglandinas en las células estromales decidualizadas.

Introducción

La decidualización del endometrio humano es un proceso que incluye diferenciaciones morfológicas y funcionales, esenciales para la implantación exitosa y el mantenimiento del embarazo. Este proceso involucra la transformación de las células estromales del endometrio en células deciduales redondeadas y de mayor tamaño. Estas células expresan una serie de proteínas específicas, como prolactina, proteína transportadora del factor de crecimiento similar a la insulina-1 y factor tisular.

En diversos modelos se ha demostrado que las prostaglandinas (PG) son necesarias para el inicio y el mantenimiento de la decidualización y cumplen un papel fundamental en la ovulación, la implantación, la menstruación y el parto. Los mecanismos responsables del transporte de las PG sintetizadas hacia afuera de las células productoras, por difusión simple o mediante un transportador, aún no han sido totalmente dilucidados. Sin embargo, el ingreso de las PG al interior de las células parece ser escaso y se sospecha que estaría mediado por proteínas transportadoras como el transportador de PG (TPG). Este presenta una alta afinidad por PGE₁, PGE₂, PGF_2-alfa y PGD₂. Recientemente, se demostró la expresión del TPG en el endometrio humano.

El objetivo del presente estudio consistió en investigar la expresión y la función del TPG en las células endometriales estromales decidualizadas.

Materiales y métodos

Se obtuvieron biopsias endometriales de mujeres con ciclos menstruales regulares, sometidas a una evaluación ginecológica por patologías benignas. Estas muestras fueron examinadas histológicamente para confirmar la fase del ciclo menstrual y la ausencia de neoplasia o endometritis. Se obtuvo una biopsia en la fase menstrual, 2 en la fase proliferativa y una en la secretoria. El aislamiento y el cultivo de las células estromales del endometrio fueron realizados según técnicas convencionales. La decidualización fue inducida mediante la combinación de AMPc y acetato de medroxiprogesterona. Las células fueron utilizadas para experimentos de influjo o para el análisis de las proteínas, la extracción del ARN y de las PG intracelulares. Mediante un sistema de inmunoanálisis se midieron los niveles de prolactina. La extracción del ARN y su procesamiento fueron realizados mediante transcriptasa inversa y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. La concentración de TPG fue determinada a partir del número de copias mediante curvas convencionales. Con la técnica de western blot se identificaron el TPG, la ciclooxigenasa-1 (COX-1), la COX-2, la beta-actina, la PGF_2-alfa sintetasa (AKR1B1) y la mPGES-1. Mediante el análisis de variancia, seguido de la prueba de Fisher, las pruebas de comparación múltiple de Duncan y Student-Newman-Keuls se efectuó el análisis estadístico. Para comparar los niveles intracelulares y extracelulares de PG se utilizó la prueba de la t de Student.

Resultados

En primer lugar, la decidualización fue identificada mediante la morfología de las células. Las células estromales decidualizadas adquirieron una forma redondeada, aspecto aplastado y núcleos grandes, con abundante citoplasma. En segundo lugar, la decidualización fue confirmada por la medición de la prolactina, con la técnica de enzimoinmunoanálisis (ELISA). Las células control secretaron un nivel basal de prolactina; en cambio, aquéllas tratadas con la combinación de medroxiprogesterona y AMPc indujeron un aumento reducido de las concentraciones de prolactina en los primeros 6 días. Luego se observó una estimulación significativa de la prolactina (p < 0.05). A los 10 días se detectaron los niveles más altos de prolactina en las células tratadas.

La expresión del ARNm de TPG aumentó 9 veces en las células deciduales (media ± SEM = 11.6 ± 0.6), en comparación con las células control (1.25 ± 0.4; p < 0.05), a los 10 días.

En las células estromales decidualizadas, la expresión de la proteína TPG aumentó 2 veces en comparación con las células control. El análisis de western blot demostró un incremento de 13.8 veces en la COX-1, de 3.8 veces en la COX-2, de 3.9 veces en la aldocetoreductasa 1B1 (AKR1B1) y de 12 veces en la expresión de la sintetasa PGE microsomal-1 (mPGES-1) en las células estromales decidualizadas, en comparación con las células control.

Los experimentos de influjo celular fueron realizados luego de la inducción de la decidualización por 10 días. A los 20 minutos, las células estromales decidualizadas demostraron un nivel más alto de captación, en comparación con las células control. Además, esta captación fue inhibida mediante el tratamiento previo con 1 mmol/l de un inhibidor orgánico del transportador aniónico DIDS, lo que indica que la mayor captación de [3H]PGE2 por las células deciduales está mediada por un transportador de aniones orgánico. Dado el aumento del ARNm de TPG y de la expresión de las proteínas en las células estromales decidualizadas, es muy posible que la mayor recaptación de [3H]PGE2 por las células deciduales sea regulada por el TPG.

En cuanto a las PG en las células control, los niveles extracelulares de PGF2-alfa fueron más altos (p < 0.05) que los intracelulares, en tanto que ambas concentraciones fueron iguales para PGE2. En las células estromales decidualizadas, la distribución de las concentraciones intracelular y extracelular de PGE2 y PGF2-alfa fue a la inversa: más alta para la primera y más baja para la segunda PG. Por último, la acumulación total de PGF2-alfa, aumentó (p < 0.05) en las células decidualizadas, en comparación con las células control.

Discusión

Los autores del presente estudio sugieren que el papel de las PG en el proceso de la decidualización aún no ha sido totalmente aclarado. Estudios previos demostraron que la PGE2 activa a la adenilato ciclasa con el consiguiente aumento de las concentraciones de AMPc a través de los receptores EP2 o EP4. Sugieren que se requieren altas concentraciones intracelulares de AMPc para sensibilizar a las células a la acción de la progesterona.

Dado que la PGE2 produce vasodilatación y la PGF2-alfa vasoconstricción, los autores sostienen que las PG también pueden cumplir un papel en la decidualización, al contribuir a los cambios en la permeabilidad vascular que acompañan a este proceso a promover la invasión leucocitaria y a favorecer la receptividad uterina.

En el presente estudio se observó un aumento del ARNm y de la proteína del TPG en las células estromales decidualizadas in vitro en el día 10. Los expertos desconocen el significado de este aumento, superior al observado el día 6.

Se ha comunicado que la PGE2 se asocia con la proliferación y la apoptosis; sin embargo, dado que la producción total de esta PG (extracelular e intracelular) en las células deciduales es similar a la hallada en las células control, los autores desestiman la posibilidad de que el TPG se encuentre más involucrado en la prevención o la promoción de la apoptosis. La producción total de PGF_2-alfa (extracelular e intracelular) es significativamente más alta en las células deciduales en comparación con las células control y esto, según los expertos, puede relacionarse con la respuesta angiogénica involucrada en la decidualización. Por cierto, recientemente se confirmó la importancia de la PGF_2-alfa y del receptor de la serie de los prostanoides F como factores angiogénicos en el endometrio.

Los autores concluyen que, a través del presente estudio, lograron demostrar un aumento de la expresión del ARNm y de la proteína del TPG, así como de las enzimas principales en la biosíntesis de las PG durante el proceso de decidualización de las células estromales endometriales in vitro. Los experimentos de influjo celular, así como el aumento de los niveles intracelulares de PG en las células deciduales, sugieren firmemente que la mayor captación de PG por estas células está mediada por el TPG.

Especialidad: Bibliografía - Farmacología