Investigan el Papel de la Cadherina E y la Betacatenina en la Infertilidad Asociada a Endometriosis

• AUTOR : Matsuzaki S, Darcha C, Mage G y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Impaired Down-Regulation of E-Cadherin and Beta-Catenin Protein Expression in Endometrial Epithelial Cells in Mid-Secretory Endometrium of Infertile Patients with Endometriosis
• CITA : Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 95(7):3437-3445, Jul 2010
• MICRO : La disminución o la pérdida de la expresión de la cadherina E y la betacatenina durante la ventana de implantación podría permitir la disociación de las células epiteliales y la invasión del blastocisto; la alteración de este mecanismo podría relacionarse con la infertilidad asociada a la endometriosis.

Introducción

La endometriosis es un trastorno ginecológico benigno frecuente que se asocia a infertilidad y dolor pelviano. Afecta aproximadamente a un 10% a 15% de las mujeres en edad reproductiva y a un 25% a 50% de todas las mujeres con esterilidad. A pesar de estas estadísticas, los mecanismos subyacentes de la infertilidad asociada a la endometriosis siguen siendo inciertos.

El proceso de implantación se puede clasificar en tres etapas: aposición, adherencia e invasión. Diversos estudios demostraron en ratones que la cadherina E endometrial es importante para el acoplamiento y posterior invasión del blastocisto. La betacatenina se identificó originalmente como un componente integral del complejo proteico de adherencia de la cadherina. Sin embargo, también es un mediador intracelular esencial para los caminos de señalización asociados a la proteína Wnt. La señalización Wnt desempeña un papel importante en la implantación embrional en ratones, y estudios recientes sugieren que también podría ser importante en el proceso de implantación embrionaria en seres humanos.

Se comprobó que la expresión de ARNm de cadherina E endometrial es mayor durante la fase secretoria. No obstante, muchos ensayos inmunohistoquímicos probaron que no existe variación cíclica en la expresión de cadherina E en el endometrio humano. Además, no está claro si existe una variación cíclica en la expresión de betacatenina en ese tejido.

Hasta ahora se logró demostrar que la expresión de numerosas moléculas de adherencia, tales como integrinas y ligandos de selectina L, se encuentra alterada durante la ventana de implantación en pacientes infértiles con endometriosis. Por lo tanto, es necesario conocer si la expresión de cadherina E y betacatenina está alterada en estas pacientes durante ese período.

En el presente estudio los autores investigaron los niveles tanto de las proteínas cadherina E y betacatenina como de su ARNm en el endometrio de pacientes infértiles con distintas formas de endometriosis, a lo largo de su ciclo menstrual. Además incluyeron pacientes infértiles con fibromas uterinos (FU) y esterilidad idiopática (EI) como otros grupos de pacientes infértiles, y mujeres fértiles sanas como grupo control.

Pacientes y métodos

Los criterios de inclusión fueron: 1) ciclos menstruales regulares (entre 26 y 32 d); 2) edad menor de 38 años; 3) un mínimo de 2 años de infertilidad con deseo de concepción actual; y 4) ausencia de tratamientos hormonales y de anticonceptivos intrauterinos durante al menos 6 meses antes de la cirugía. Los criterios de exclusión fueron: oclusión tubaria bilateral, pacientes con factor de infertilidad masculino y distorsión mecánica de la cavidad endometrial por fibromas.

Se realizaron biopsias endometriales justo antes de la cirugía. Cada muestra se dividió en dos porciones, la primera se destinó al examen histopatológico, y la segunda se conservó a -20 ºC hasta ser procesada.

A partir de las muestras conservadas se realizó la extracción del ARN, el cual se examinó para comprobar su integridad y luego se amplificó utilizando la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR).

Los preparados histológicos fueron sometidos a tinción inmunohistoquímica con anticuerpos monoclonales de ratones dirigidos contra cadherina E, betacatenina total o betacatenina de terminal N desfosforilado. Luego se cuantificaron las células teñidas. Finalmente se realizó el análisis estadístico con análisis de varianza de una vía (ANOVA) seguido por el método de Scheffé. Se consideró estadísticamente significativo un valor de p < 0.05.

Resultados

Expresión de ARNm de cadherina E y ARNm de betacatenina

No se halló una diferencia cíclica significativa en los niveles de expresión de ARNm de cadherina E ni de betacatenina en células epiteliales glandulares en ninguno de los grupos. Tampoco se hallaron diferencias significativas entre los diferentes grupos de pacientes durante la misma fase endometrial. No se detectó ARNm de cadherina E en células estromales ni se encontraron diferencias significativas en los niveles de ARNm estromal de betacatenina entre los distintos grupos de pacientes durante la misma fase endometrial.

Expresión proteica de cadherina E

Solamente se encontró tinción positiva para la cadherina E en la membrana de las células epiteliales. Su expresión fue significativamente menor durante las fases proliferativa (P), secretoria temprana (STe) y secretoria media (SM) comparada con la expresión en la fase secretoria tardía (STa) en los controles de mujeres sanas fértiles. Sin embargo, no se demostró una diferencia cíclica significativa en pacientes infértiles con diversos tipos de endometriosis, ni en las que presentaban FU. La expresión de cadherina E fue significativamente mayor en células de pacientes infértiles con endometriosis o EI, comparada con su expresión en las pacientes de control sanas y fértiles durante la fase SM. A su vez, la expresión de cadherina E fue considerablemente menor en células de pacientes infértiles con endometriosis, comparada con su expresión en las pacientes de control sanas y fértiles durante la fase STa. No se detectaron diferencias significativas durante las fases P o STe.

Expresión proteica de betacatenina total

La tinción fue positiva para betacatenina total en las membranas de células epiteliales y endoteliales. Además, en ocasiones se encontró una tinción citoplasmática débil en las células estromales. La expresión de betacatenina total fue mucho menor durante las fases STe y SM comparada con la expresión en las fases P y STa en las mujeres sanas fértiles del grupo control y las pacientes infértiles con FU, sin hallarse diferencias significativas entre estas dos últimas fases mencionadas en dichas pacientes. En las mujeres infértiles con endometriosis, la expresión de betacatenina total fue significativamente menor durante la fase STe comparada con la expresión en las fases P y STa, sin detectarse diferencias entre las fases P, SM y STa. La expresión de betacatenina total fue siginificativamente menor en las mujeres del grupo control comparada con la de pacientes infértiles con endometriosis o EI durante la fase SM.

Expresión de betacatenina desfosforilada durante la fase SM

Se detectó un puntillado discontinuo en la membrana de células endoteliales y epiteliales de pacientes infértiles, el cual no se halló en el grupo control. La expresión de betacatenina desfosforilada fue significativamente mayor en células de pacientes infértiles con endometriosis o EI, comparada con su expresión en las pacientes de control sanas y fértiles durante la fase SM.

Expresión de cadherina E, betacatenina total y betacatenina desfosforilada en mujeres que utilizaban anticonceptivos orales

Se encontró tinción membranosa positiva para cadherina E y betacatenina total en células epiteliales glandulares y luminales. La betacatenina también fue hallada en células endoteliales y estromales. La expresión de cadherina E y betacatenina total fue significativamente mayor en mujeres sanas fértiles que utilizaban anticonceptivos orales (ACO) que en la fase SM de mujeres infértiles con endometriosis, FU o EI y mujeres fértiles que no empleaban ACO. Además, durante la fase SM se detectaron mucho mayores niveles de betacatenina desfosforilada en mujeres fértiles que consumían ACO que en mujeres fértiles del grupo control y mujeres infértiles con FU.

Discusión y conclusiones

Los autores consideran que el presente ensayo demostró que no hay diferencias en los niveles de expresión de ARNm de cadherina E o betacatenina entre los distintos grupos de pacientes. Tampoco se detectaron diferencias significativas a lo largo del ciclo menstrual.

Sin embargo, este ensayo reveló que existía muy baja o nula expresión de las proteínas cadherina E y betacatenina total durante la fase SM en las mujeres sanas fértiles del grupo control. La expresión de estas proteínas era mucho mayor en mujeres infértiles con endometriosis o EI en esta fase. Estos hallazgos sugieren que la disminución o la pérdida temporal de la expresión de las proteínas cadherina E y la betacatenina durante la ventana de implantación podría ser necesaria para permitir la disociación de las células epiteliales y la invasión del blastocisto, en concordancia con los resultados de diversos ensayos recientes realizados con animales.

Además, el presente estudio reveló la tinción puntiforme de betacatenina desfosforilada en la membrana de células epiteliales endometriales de pacientes infértiles durante la fase SM. Dicha proteína está claramente relacionada con la actividad Wnt, lo cual sugiere que el camino de señalización Wnt/betacatenina podría estar activado en pacientes infértiles durante la fase SM.

Paralelamente, un trabajo reciente demostró que durante la fase P del ciclo, los altos niveles de 17-betaestradiol inducen el camino de señalización Wnt/betacatenina para estimular la proliferación, mientras que en la fase S los niveles de progesterona inhiben esta vía. Por lo tanto, la resistencia a la progesterona podría fallar en la inhibición del camino de señalización Wnt/betacatenina, lo que resultaría en la persistencia de la proliferación endometrial y la decidualización alterada durante la ventana de implantación en pacientes infértiles con endometriosis.

La utilización de ACO modifica la expresión de las integrinas. En este ensayo se pudo determinar que la expresión de las proteínas cadherina E y betacatenina era mayor en las células epiteliales de las mujeres que consumían ACO que en las que no lo hacían.

La integridad estructural y funcional del complejo cadherina-catenina se regula mediante la fosforilación. Se comprobó que un potente inhibidor del camino de señalización Wnt se expresa en células estromales endometriales humanas y es aumentado por la progesterona. Por lo tanto, este camino de señalización podría ser regulado negativamente durante la ventana de implantación. Sin embargo, se descubrió que la inhibición del camino de señalización Wnt producía disminución o ausencia de expresión de betacatenina en mujeres fértiles y aumento de adherencia celular mediada por cadherina en mujeres infértiles.

Más allá de todo, este estudio carece de todo tipo de evaluación sobre la interacción entre el endometrio y el embrión. Investigaciones con animales sugirieron que la cadherina E y la betacatenina disminuidas podrían ser aumentadas en el sitio de implantación ante la presencia de un embrión. Por cuestiones éticas, se sabe poco sobre esta interacción en seres humanos.

Deberían realizarse más estudios para investigar los procesos por los cuales la cadherina E y la betacatenina son modificadas para comprender mejor los mecanismos subyacentes de la infertilidad asociada a la endometriosis.

Especialidad: Bibliografía - Ginecología