La Acción Antiagregante Plaquetaria de la Hesperetina

• AUTOR:Jin Y, Han X, Yun Y y colaboradores
• TITULO ORIGINAL:Antiplatelet Activity of Hesperetin, a Bioflavonoid, Is Mainly Mediated by Inhibition of PLC-Gamma2 Phosphorylation and Cyclooxygenase-1 Activity
• CITA:Atherosclerosis 194(1):144-152, Sep 2007
• MICRO: La hesperetina es un flavonoide presente en los cítricos, con actividad antiagregante plaquetaria que se basa en la inhibición de algunas enzimas como la ciclooxigenasa-1 y la fosfolipasa C. Estos efectos pueden ser beneficiosos para los pacientes con enfermedades del sistema cardiovascular.

Introducción

La activación y la consecuente agregación plaquetaria son esenciales en la patogenia de la enfermedad vascular cardíaca, cerebral y periférica. Ante la lesión de un vaso sanguíneo, la exposición de las macromoléculas subendoteliales estimula la activación de las plaquetas y el inicio del proceso de hemostasia. Entre otras sustancias, la integrina alfa2beta1 y la glucoproteína VI activan la vía metabólica de la fosfolipasa C-gamma2 (FLCgamma2) que provoca un incremento del calcio citoplasmático, así como cambios en la morfología y en la liberación del contenido de los gránulos plaquetarios. La agregación de las plaquetas se debe a la liberación de prostaglandina H₂ y de tromboxano A₂ (TXA₂), un metabolito del ácido araquidónico que se considera uno de los agonistas más potentes de la activación plaquetaria y de la formación de trombos. Esta molécula actúa por medio de la interacción con un receptor acoplado a una proteína G que induce la activación de la fosfolipasa C beta y desencadena cambios morfológicos, como la extensión de pseudópodos y la adhesión de las plaquetas a la superficie vascular dañada.

Entre las sustancias capaces de inhibir la activación de las plaquetas, los autores mencionan a los flavonoides, compuestos fenólicos de bajo peso molecular presentes en distintos alimentos. Entre estos productos se destaca a la hesperetina, una aglicona de la hesperidina que, además de presentar propiedades antiinflamatorias, anticancerígenas y antihipertensivas, se asocia con la inhibición de la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad y con el descenso del colesterol en animales de laboratorio. Los investigadores se propusieron determinar el mecanismo antiagregante plaquetario de este bioflavonoide en un modelo in vitro.

Materiales y métodos

Se seleccionaron conejos blancos que fueron aclimatados y nutridos con una preparación comercial estándar durante una semana. Se obtuvieron muestras de sangre de la arteria auricular a partir de las cuales se lavaron y separaron las plaquetas.

Para medir la agregación inicial, las células se incubaron durante 3 minutos y se aplicó un método turbidométrico. En el mismo medio, se determinaron las concentraciones de la prostaglandina D₂ y del TXB₂, un metabolito estable del TXA₂ y la actividad de la sintasa del TXA₂. Del mismo modo, se calculó la movilización intracelular de calcio por medio de técnicas de fluorescencia y se midió la secreción de serotonina y la liberación de ácido araquidónico. Por otra parte, mediante inmunotransferencia se analizaron las concentraciones de las diversas proteínas plaquetarias, como la FLCgamma2.

Todos los datos reunidos se procesaron estadísticamente con ANOVA para comparaciones múltiples y se consideró significativo un valor de p < 0.05.

Resultados

Con el fin de comparar la selectividad de la hesperetina ante los efectos de distintos agonistas de la agregación plaquetaria, se establecieron las concentraciones necesarias de esas sustancias para alcanzar una tasa de agregación del 70% ± 5.5%. En función de este modelo comparativo, se observó que la hesperetina podía inhibir la agregación plaquetaria inducida por el colágeno y el ácido araquidónico de manera dependiente de la dosis. Por el contrario, la hesperetina se asoció con inhibición mínima del U46619 (un análogo del TXA₂) y no tuvo efectos sobre la agregación inducida por la trombina. En consecuencia, los autores señalan que la hesperetina compromete de manera selectiva la agregación plaquetaria cuando se origina por las vías metabólicas del ácido araquidónico o del colágeno.

Del mismo modo, la hesperetina disminuye la producción de TXB₂ y de prostaglandina D₂ de forma directamente proporcional a la concentración, por lo cual se estima que este bioflavonoide inhibe la actividad de la ciclooxigenasa (COX), enzima que sintetiza ambos icosanoides en el punto de partida del ácido araquidónico. En coincidencia, en presencia de indometacina (un antagonista de la COX), se observó la inhibición casi completa de la generación de TXB₂ y prostaglandina D₂. Sin embargo, la síntesis del TXA₂ requiere de la actividad tanto de la COX como de la sintasa de TXA₂, que cataliza la conversión de prostaglandina H₂ en TXA₂ en las plaquetas. No se verificaron efectos sobre las acciones de la sintasa de TXA₂ con todas las concentraciones de hesperetina utilizadas en este ensayo; en cambio, ésta se asoció con la reducción de la liberación de serotonina y ácido araquidónico y de la movilización intracelular de calcio a partir de las plaquetas, ya que ambos procesos guardan relación con la agregación plaquetaria mediada por el colágeno.

En otro orden, con el objetivo de distinguir el mecanismo de acción subyacente de la hesperetina, los investigadores midieron la actividad enzimática de la FLCgamma2 después de incubar las plaquetas aisladas y lavadas con concentraciones crecientes de esta sustancia. De acuerdo con los resultados, la hesperetina se asoció con la inhibición de la acción de la FLCgamma2 en forma proporcional a la dosis (10.1%, 45.4%, 60.3% y 87.5% para concentraciones de 10 m M, 20 m M, 50 m M y 100 m M, respectivamente).

Discusión

En publicaciones anteriores se ha señalado que los antioxidantes de la familia de los flavonoides tienen efectos antiagregantes plaquetarios in vitro y ex vivo. Del mismo modo, una dieta con alto contenido en estas sustancias se asocia con la antiagregación plaquetaria in vivo en los seres humanos. En este estudio, los autores afirman que la hesperetina, un flavonoide presente en los pomelos y las naranjas, es un potente antagonista de la agregación plaquetaria inducida por el colágeno y el ácido araquidónico, cuyo mecanismo de acción consiste en la disminución de la actividad de la COX-1 y de la FLCgamma2.

Según los datos reunidos, los investigadores señalan que la hesperetina inhibió la agregación plaquetaria provocada por el ácido araquidónico de un modo dependiente de la dosis, pero que, aun en presencia de concentraciones elevadas, sólo se observaron efectos mínimos cuando la agregación plaquetaria era desencadenada por el U46619. Por lo tanto, se propone que la hesperetina no actúa como antagonista directo del receptor de TXA₂ sino sobre la vía del ácido araquidónico. Dado que tanto el TXA₂ como la prostaglandina D₂ se sintetizan por la acción de la COX-1, se estima que la hesperetina inhibe la agregación plaquetaria al disminuir la actividad de esta enzima. De todos modos, se considera que, debido a su estructura molecular, algunos flavonoides pueden tener un débil efecto antagonista directo sobre el receptor de TXA₂.

Por otra parte, la hesperetina también se asoció con la antiagregación plaquetaria mediada por la exposición al colágeno de manera dependiente de la dosis.

Este mecanismo de acción no se relaciona con la vía metabólica del ácido araquidónico, ya que, en presencia de indometacina (antagonista de la COX-1), la tasa máxima de antiagregación inducida por el colágeno se redujo sólo en un 25% en comparación con los controles. En consecuencia, se considera que la hesperetina puede afectar a algunos componentes de la vía del colágeno de manera independiente de su acción sobre la COX-1, probablemente por medio de la disminución de la movilización de calcio intracelular. Dado que estos cambios en la concentración citoplasmática de calcio se asocian con la actividad de la FLCgamma2, los autores evaluaron los efectos de la hesperetina sobre esta enzima y comprobaron que su actividad disminuyó en forma proporcional a la dosis de esta sustancia. En consecuencia, sugieren que la inhibición de la FLCgamma2 es un proceso que permite explicar los efectos de la hesperetina sobre la agregación plaquetaria mediada por el colágeno. Sin embargo, advierten que el mecanismo exacto de acción no se conoce, aunque se presume que la hesperetina no es un antagonista directo de la FLCgamma2, sino que actúa mediante la inhibición de un paso previo en la activación de la enzima. Fundamentan esta observación en la falta de efectos de la hesperetina sobre la agregación plaquetaria inducida por la trombina, aun con dosis elevadas. Entre los sitios de acción propuestos, se han señalado tanto al receptor del fragmento Fc de la cadena gamma del colágeno como a las tirosina quinasas, con base en observaciones experimentales.

Por otro lado, los investigadores señalan que, debido a que la hesperetina se une a las proteínas de las membranas celulares, no se ha determinado la concentración efectiva intracelular de esta sustancia, aun en presencia de niveles plasmáticos elevados. De acuerdo con artículos anteriores, la administración de fracciones purificadas y micronizadas de flavonoides con un 10% de hesperetina se relacionó con la inhibición significativa de la función plaquetaria in vivo.

Conclusiones

Los autores aseveran que la hesperetina se asoció con la inhibición de la agregación plaquetaria inducida por el colágeno y por el ácido araquidónico, por medio de su actividad inhibitoria sobre la FLCgamma2 y la COX-1. Estas propiedades pueden ser beneficiosas para los pacientes en los que la agregación plaquetaria representa un fenómeno determinante en el inicio de una trombosis. Asimismo, la hesperetina contribuye a los efectos benéficos de la ingesta de pomelos y naranjas para el sistema cardiovascular.

Especialidad: Bibliografía - Cardiología