La Doxiciclina Podría ser Util en Mujeres que Utilizan Anticonceptivos con Progesterona y Tienen Sangrado Uterino Irregular

• AUTOR : Li R, Luo X, Pan Q y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Doxycycline Alters the Expression of Inflammatory and Immune-Related Cytokines and Chemokines in Human Endometrial Cells: Implication in Irregular Uterine Bleeding
• CITA : Human Reproduction 21(10):2555-2563, Oct 2006
• MICRO : La doxiciclina modula la expresión endometrial de múltiples citoquinas/quimioquinas inflamatorias y podría ser útil en mujeres que presentan sangrado uterino irregular, en especial en aquellas que utilizan anticonceptivos con progestágenos.

Los anticonceptivos más efectivos son las píldoras/implantes/inyectables con predominio de progesterona o que contienen solamente progestinas. No obstante, tienen desventajas relacionadas con los efectos adversos (por ejemplo, sangrado uterino irregular) que, en general, aparecen durante el primer año y mejoran con el tiempo de uso. El tratamiento de estas alteraciones es empírico (etinilestradiol, ibuprofeno, anticonceptivos orales y levonogestrol) y mejora los síntomas del sangrado irregular de manera temporaria por lo que muchas pacientes deben abandonar el uso de estos dispositivos.

Los cambios endometriales que se producen durante la menstruación se acompañan del intercambio de diversos mediadores proinflamatorios y enzimas del tipo de las proteasas. Durante el ciclo menstrual, el endometrio expresa diferentes factores angiogénicos, proteasas y mediadores inflamatorios. Sin embargo, las modificaciones en la expresión endometrial que aparecen antes y durante la menstruación en mujeres que utilizan anticonceptivos con progestina, son responsables, en parte, de la menstruación normal y el sangrado uterino irregular.

La doxicicilina (DOX) es un antibiótico de amplio espectro, que forma parte de la familia de las tetraciclinas y es activo frente a una amplia variedad de microorganismos grampositivos y gramnegativos. Recientemente se investigó su acción en enfermedades humanas (osteoartritis, artritis reumatoidea, periodontitis y úlceras de la córnea) y en animales, caracterizadas por niveles elevados de mediadores proinflamatorios y proteasas. Los efectos beneficiosos de este antibiótico y de sus análogos no se deben a la acción antimicrobiana sino a la inhibición de células proinflamatorias y proteasas.

Según la hipótesis de los autores, DOX podría modificar la producción de citoquinas/quimioquinas y alterar los resultados del sangrado uterino irregular. Para confirmar la hipótesis utilizaron un modelo in vitro con epitelio glandular de endometrio y cultivo celular de epitelio superficial de endometrio humano (HES [human endometrial surface]). Primero determinaron los efectos citotóxicos potenciales y las propiedades antiinflamatorias de DOX y, luego, examinaron los efectos de DOX sola o combinada con 17-beta-estradiol (E2), acetato de medroxiprogesterona (MPA) y E2 + MPA, que representa el estado endometrial al que se exponen los anticonceptivos.

Materiales y métodos

Los investigadores aislaron células epiteliales glandulares de endometrio (GEC [glandular epithelial cells]) y células del estroma endometrial (ESC [endometrial stromal cells]) proveniente de tejido endometrial de mujeres premenopáusicas, histerectomizadas por razones médicas. Ninguna se encontraba bajo tratamiento hormonal al momento de la cirugía. Los materiales fueron cultivados en medios apropiados y las líneas celulares se obtuvieron de distintos facultativos, expertos en el tema.

Durante las menstruaciones y el sangrado irregular aumenta la expresión endometrial del factor de necrosis tumoral (TNF [tumour necrosis factor]), una citoquina proinflamatoria. Los autores evaluaron la acción de DOX sobre TNF en aislamientos provenientes de ESC. Luego de cultivarlos durante 24 horas, la línea celular fue expuesta a diferentes concentraciones de DOX. Por último, recolectaron los cultivos y determinaron las concentraciones de TNF mediante ELISA (enzyme-link inmunoabsorbent assay). También establecieron el efecto de DOX, sola o combinada con E2, MPA y E2 + MPA sobre la síntesis de citoquinas y quimioquinas inflamatorias o dependiente de inmunidad producidas por las células endometriales. Utilizaron cultivos de ESC, GEC y HES. Las determinaciones se realizaron mediante protocolos establecidos y distintas técnicas.

Los resultados de los 3 experimentos independientes y realizados por duplicado se presentaron como mediana ± desvío estándar y fueron analizados estadísticamente con la prueba de la t de Student y análisis de variancia. En todos los casos se consideró significativo un valor de p < 0.005.

Resultados

Efecto de DOX sobre el crecimiento celular

Según los expertos, en concentraciones de 0.1m g/ml, DOX no tuvo efecto inhibitorio significativo sobre el índice de incorporación de 3H-timidina en ESC, pero sí con concentraciones ≥ 50 m g/ml en comparación con el control. Por su parte, las concentraciones de 100 m g/ml de DOX inhibieron el índice de incorporación de 3H-timidina al ADN en un 30% en comparación con el control. En estas concentraciones DOX no tuvo acción significativa sobre la proliferación celular. Con GEC y HES se observaron resultados similares.

Efectos de DOX sobre la producción de TNF-alfa

La producción de TNF-alfa en ESC fue reducida con DOX en comparación con el control. La inhibición máxima de TNF-alfa (50%) se produjo con DOX ≥ 25 m g/ml (p < 0.005). Los autores utilizaron concentraciones de 25 m g/ml de DOX, de acuerdo con lo observado con ESC, para analizar la producción de otras citoquinas y quimioquinas con ESC, GEC y HES.

Efectos de DOX sobre la producción de citoquinas/quimioquinas

Se evaluó la acción de DOX sola o combinada con esteroides ováricos sobre la producción de varias citoquinas y quimioquinas de importancia en las células endometriales. Los medios ESC, GEC y HES cultivados en condiciones específicas produjeron diferentes niveles de citoquinas, quimioquinas y factores de crecimiento (interleuquina [IL]-1, IL-2, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, TNF-alfa, factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, entre otros). Las células produjeron niveles escasos, casi indetectables (< 20 pg/ml), de la mayoría de las citoquinas, quimioquinas y factores de crecimiento, y estos niveles no mostraron modificaciones con la presencia de DOX, E2, MPA y sus combinaciones. Los cultivos ESC, GEC y HES causaron niveles variables de IL-6, IL-8, IL-15, MCP (monocyte chemotactic protein)-1, RANTES (regulated on activation and normally T-cell expressed and presumably secreted) e IL-10. La síntesis de la mayoría de las citoquinas aumentó luego de añadir E2, MPA y la combinación de éstos, en comparación con el control. A su vez, el tratamiento de ESC, GEC y HES con TNF-alfa (25 m g/ml), citoquina proinflamatoria, indujo un incremento significativo en la síntesis de IL-6, IL-8, IL-15, MCP-1, RANTES e IP -10 (p < 0.05).

Según los expertos, DOX (25 m g/ml) inhibió o estimuló en forma significativa la producción de IL-6, IL-8, IL-15, MCP-1, RANTES e IP-10 en los medios ESC, GEC y HES. Además, la acción conjunta de DOX con E2, MPA y E2 + MPA disminuyó la síntesis de IL-6, IL-8, IL-15, MCP-1, RANTES e IP-10. Sin embargo, la acción de DOX dependió del cultivo celular, los esteroides y las citoquinas/quimioquinas.

Discusión

Durante los últimos años se investigó la acción de DOX en concentraciones antimicrobianas subóptimas en enfermedades que muestran niveles elevados de mediadores proinflamatorios y proteasas como osteoartritis, artritis reumatoidea, periodontitis del adulto y enfermedad inflamatoria pélvica. En estas circunstancias, DOX inhibe o reduce la producción local de mediadores proinflamatorios y proteasas y facilita el proceso de reparación tisular. Otro contexto donde se observa el aumento de estos mediadores proinflamatorios es el sangrado uterino irregular secundario al uso de anticonceptivos con progestágenos. Por lo tanto, DOX podría ser útil en estas circunstancias.

Los autores utilizaron medios celulares in vitro con ESC, GEC y HES y demostraron que DOX modifica la síntesis de varias citoquinas/quimioquinas inflamatorias sin toxicidad agregada, excepto en dosis elevadas. No obstante, los efectos de este agente sobre estas citoquinas/quimioquinas fueron inhibitorios, estimulantes o neutros. La acción conjunta de DOX con E2, MPA y E2 + MPA, que representa el ambiente endometrial, también modificó la producción de citoquinas/quimioquinas. Todavía no se conoce cómo DOX altera el mecanismo de regulación de expresión de estos mediadores inflamatorios endometriales pero se estima que utilizaría mecanismos moleculares complejos.

Los expertos hallaron que, durante 24 horas de cultivo en los medios ESC, GEC y HES, la producción de estas citoquinas fue baja y a veces indetectable. También encontraron que casi la totalidad de la producción de las citoquinas/quimioquinas fue influida por el tratamiento con esteroides ováricos. Las citoquinas/quimioquinas que respondieron a los tratamientos con E2, MPA y E2 + MPA dependieron del cultivo celular y los esteroides. Cualquier diferencia entre los resultados observados por los autores con otros trabajos puede deberse al tipo de ensayo utilizado -ELISA versus multiplexing- y a los medios de cultivo.

La acción de DOX sobre las citoquinas/quimioquinas se produjo en dosis subterapéuticas y en diferentes sitios. Esta droga sola o combinada con esteroides ováricos o TNF-alfa modificó la producción de IL-1alfa, IL-6, IL-8, IL-15, MCP-1, RANTES e IP-10 por parte de las células endometriales. La modulación de la respuesta fue más efectiva con ESC en comparación con GEC y HES. Por su parte, DOX fue menos eficaz en modular el efecto de TNF-alfa sobre la producción de citoquinas/quimioquinas en comparación con células tratadas con esteroides ováricos, si bien la reducción en la producción de TNF-alfa dependió de la dosis con ESC.

La ruptura del endometrio durante las menstruaciones y el sangrado uterino irregular secundario a anticonceptivos con progestágenos se produce en el estroma; por lo tanto, el tratamiento combinado de DOX + MPA podría modificar la síntesis local de estos mediadores inflamatorios. El tratamiento con DOX reduciría la ruptura del tejido endometrial durante el sangrado, dado que las células inflamatorias e inmunes son la principal fuente de citoquinas/quimioquinas proinflamatorias y proteasas. Sin embargo, durante las menstruaciones, la elevada expresión de TNF-alfa reduciría o limitaría la acción de DOX.

Un estudio piloto reciente demostró que 100 mg de DOX cada 12 horas durante 5 días es tan eficaz como mifepristona o mifepristona + etinilestradiol para reducir la cantidad de días de sangrado uterino en mujeres que utilizan anticonceptivos con progestágenos. Es interesante señalar que un día antes y 3 días después de realizar fertilización in vitro se utilizan 50 mg de DOX cada 6 horas. Como tiene propiedades antiinflamatorias y antimicrobianas, este agente también puede ser eficaz en mujeres con endometritis secundaria a implantes Norplant que presentan sangrado uterino.

Los autores concluyen señalando que DOX, a través de sus propiedades antiinflamatorias, modifica el perfil de expresión de varias citoquinas/quimioquinas ubicadas en células endometriales y mejoran el sangrado uterino irregular asociado con anticonceptivos con progestágenos.

Especialidad: Bibliografía - Ginecología