La Nefropatía Diabética se Asocia con Reducción de los Niveles Circulantes de Estradiol y Desequilibrio en la Expresión de los Receptores a Estrógenos en el Riñón

• AUTOR : Wells C, Riazi S, Mankhey R y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Diabetic Nephropathy is Associated with Decreased Circulating Estradiol Levels and Imbalance in the Expression of Renal Estrogen Receptors
• CITA : Gender Medicine 2(4):227-237, Dic 2005
• MICRO : Investigación del papel de los estrógenos y de los subtipos de receptores estrogénicos en tejido renal en un modelo experimental de nefropatía diabética.

Introducción

La diabetes mellitus (DBT) es una entidad altamente prevalente y que condiciona un elevado riesgo para el desarrollo de enfermedad cardiovascular de magnitud similar en varones y en mujeres. Sin embargo, no está claro si el sexo femenino presenta diferencias con su contraparte masculino en cuanto a la velocidad de desarrollo de complicaciones asociadas con la DBT, y poco se conoce acerca de las características y la dinámica de la evolución de la nefropatía diabética (ND), en especial en las mujeres en la etapa posmenopáusica. Este hecho es interesante si se tiene en cuenta que, en la mayoría de los casos, la velocidad de progresión de diferentes enfermedades renales es mayor en hombres que en mujeres, pero pareciera cierto que las mujeres diabéticas no se encuentran protegidas contra la enfermedad renal como sucede con aquellas no diabéticas. Esto presupondría que las hormonas sexuales femeninas o sus receptores celulares estarían regulados de manera diferente en la DBT, por lo que se planeó examinar la regulación estrogénica y de los receptores estrogénicos en un modelo experimental de ND.

Métodos

Los experimentos fueron efectuados en ratas Sprague-Dawley hembras mantenidas con dieta sin fitoestrógenos. Los animales fueron asignados en forma aleatoria a 3 grupos de tratamiento (GI: ratas intactas; G-OVX: ratas ovariectomizadas; G-OVX+E: ratas ovariectomizadas que recibieron suplemento con 17beta-estradiol). A su vez, a cada grupo se lo subagrupó, según asignación al azar, en diabéticos (D+) y no diabéticos (D-). Los animales fueron transformados a diabéticos mediante inyección intraperitoneal única (al momento de la ooforectomía [OVX]) de 65 mg/kg de estreptozotocina en buffer citrato 0.1 M. A los animales D- se les aplicó una inyección intraperitoneal de buffer citrato 0.1 M solamente. La glucemia se mantuvo entre 250 y 400 mg/dl mediante la administración de insulina. Siete días antes de ser sacrificadas, las ratas fueron ubicadas en cajas metabólicas para recolección de orina de 24 horas. Luego de 12 semanas de tratamiento, los animales fueron anestesiados con pentobarbital administrado por vía intraperitoneal y se tomaron muestras de sangre para dosaje de estrógenos. Se aisló la corteza del riñón derecho y se la congeló con nitrógeno líquido a fin de efectuar análisis del contenido proteico, en tanto que el riñón izquierdo fue aislado e inmerso en un líquido de fijación para análisis inmunohistoquímico.

Se efectuaron estudios adicionales en animales hembras y machos D+ y D- intactos luego de 2 semanas de la inyección intraperitoneal de estreptozotocina o su buffer.

Al momento de la OVX, las ratas recibieron por vía intraperitoneal 2 inyecciones (luego de 4 horas) de un análogo de la hormona liberadora de gonadotrofina. La inyección se repitió una semana antes del sacrificio. A las ratas asignadas a OVX+E se les administró 17beta-estradiol (5 µg/kg en 200 µl de aceite de maní) cada 4 días, en tanto que los animales no suplementados con estrógenos recibieron sólo 200 µl de aceite de maní.

El riñón fue fijado en parafina y cortado en lonjas de 4 µm, incubadas en suero de cabra y luego en anticuerpos policlonales anti-REalfa para ser luego lavadas con solución salina y reincubadas en una solución de IgG antiriñón de conejo. Otras piezas incubadas en suero salino sin Ig fueron utilizadas como control. Un observador, que desconocía el grupo al que pertenecía el animal o la pieza a observarse, analizó los resultados de la inmunomarcación con una escala de 0 a 4 puntos de intensidad. Las muestras de corteza renal se homogeneizaron en un medio especial y la concentración de proteínas se determinó por análisis colorimétrico con albúmina bovina. Las proteínas fueron transferidas a una membrana de celulosa e incubadas en una solución al 5% de leche descremada en solución salina. Luego, las membranas fueron lavadas y reincubadas en suero que contenía anticuerpos antiriñón de conejo para analizar y cuantificar posteriormente las respectivas bandas con densitometría.

Se utilizó la prueba t y el análisis de la variancia con prueba de Bonferroni. Se aceptaron como significativos valores de p < 0.05.

Resultados

Las ratas G-OVX D- presentaron un aumento del peso corporal que no mostraron los animales G-OVX D+, en tanto que en los grupos D+ se observó un incremento de los niveles de glucemia que no se notó en los grupos D-. De los grupos D+, el grupo G-OVX+E presentó niveles de glucemia 51% y 54% más bajos que GI y G-OVX, respectivamente. GI D+ presentó niveles de estradiol 51% más bajos que GI D-. En los grupos D+ y D-, los niveles de estradiol se redujeron tras la OVX.

En las ratas GI D-, los receptores a estradiol fueron localizados en los núcleos de las células mesangiales y en las células epiteliales proximales, distales y colectoras. En los animales GI D+ hubo una mayor intensidad de inmunomarcado para estrógenos (2.5) que en las anteriores. Esta intensidad fue aún mayor en OVX D+ (2.8) pero se redujo en OVX+E D+ (2.5).

En concordancia con los datos inmunohistoquímicos, no se apreciaron cambios en la expresión de proteínas del receptor estrogénico entre OVX y OVX+E en riñones provenientes de animales D- en comparación con GI D-.

En las ratas GI D+ se observó un 41% de aumento de la expresión de receptores estrogénicos comparado con GI D-, en tanto que se advirtió un 61% de incremento comparativo en OVX D+. Estos aumentos fueron atenuados en D+ con el suplemento de estrógenos.

También pudo observarse una tendencia hacia el aumento en la expresión de receptores estrogénicos en ratas hembras luego de 2 semanas de inducir DBT, al tiempo que se observaba una reducción en los niveles de estradiol de aproximadamente un 38% respecto de las 12 semanas de estado diabético.

Discusión

En este estudio se pudo demostrar que ratas portadoras de DBT inducida por estreptozotocina presentan, como ya se ha mostrado previamente, niveles circulantes bajos de estradiol y un aumento de la expresión, en tejido renal, de proteína receptora de estrógenos. Estos 2 hechos no parecieran ser consecuencia inmediata de la hiperglucemia y se considera que otros mecanismos estarían involucrados. Por ejemplo, los ovarios de mujeres con DBT tienen reducción en la actividad de una aromatasa ovárica y, en consecuencia, limitaciones para convertir los andrógenos en estrógenos.

Muchos estudios concuerdan en que las mujeres con DBT muestran déficit estrogénico y ello explicaría por qué el estado diabético hace que las mujeres igualen la línea del hombre en cuanto a complicaciones y evolución del daño de órganos blanco.

En este estudio también se pudo observar que la DBT en ratas hembras aumenta la expresión de proteínas receptoras de estrógenos (REalfa); este efecto es exagerado tras la ovariectomía y aminorado por el reemplazo estrogénico, lo que sugiere que los estrógenos en sí mismos pueden incrementar la expresión de su propio receptor.

También es factible que la insulina intervenga como regulador de la cinética de los receptores estrogénicos. Los receptores alfa median la mayor parte de los efectos beneficiosos de los estrógenos, en especial, aquellos que muestran efectos renoprotectores en el riñón que suprimen la proliferación mesangial e incrementan la degradación de colágeno tipo 1. Por el contrario, en otros estudios se observó que los efectos estrogénicos mediados a través de este tipo de receptores no serían tan beneficiosos; por ejemplo, los ratones diabéticos deficientes de receptores estrogénicos alfa tendrían menos hipertrofia glomerular y ello contribuiría al efecto protector renal.

Pocos estudios han investigado el papel de los receptores estrogénicos beta (REbeta) en el riñón; los autores señalan que las evidencias de la fijación de los estrógenos a REbeta contribuye a los efectos antiproliferativos de estas hormonas. Es más, en animales o individuos diabéticos es el desequilibrio en la relación REalfa/REbeta la que desempeña un papel importante en la evolución hacia la glomeruloesclerosis y fibrosis intersticial y, por lo tanto, el suplemento estrogénico atenuaría los efectos adversos sobre el riñón que esta situación condiciona. Así, el suplemento con estrógenos atenúa la pérdida de filtrado glomerular, la albuminuria y los índices de esclerosis glomerular e intersticial.

Los expertos proponen el empleo de terapia de reemplazo hormonal para atenuar las complicaciones asociadas con la DBT y agregan que habría fuertes evidencias que apoyan que sería útil en dosis relativamente bajas de estrógenos en lugar de las dosis más altas utilizadas en ensayos clínicos. Sin embargo, advierten que se necesitan más evidencias que surjan de estudios en mujeres con DBT para definir si el suplemento con estradiol atenúa la progresión de la ND. Asimismo, sugieren que los resultados de este estudio señalan el reemplazo estrogénico como renoprotector pues aumenta los niveles circulantes de estradiol y corrige el desequilibrio REalfa/REbeta en el riñón de la rata hembra diabética.

Especialidad: Bibliografía - Clínica Médica