La Peperina Ejerce Efecto Antiinflamatorio in Vitro

• AUTOR : Caridi LN, González-Pereyra ML, Maldonado AM y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Minthostachys verticillata (Griseb.) Epling: A South American Plant with Antiinflammatory Effect In Vitro
• CITA :  Allergy & Clinical Immunology International 18(6):234-241, Nov 2006
• MICRO : La Minthostachys verticillata (peperina) tiene componentes que inhiben la desgranulación de basófilos, cuyo efecto es similar al que se obtiene con dexametasona o teofilina. Por este motivo representa una alternativa útil de tratamiento en las enfermedades alérgicas.

Introducción

El género Minthostachys es taxonómicamente complejo, incluye 12 especies de hierbas aromáticas y de arbustos verdes pertenecientes a la familia Labiatae. Crece ampliamente en Sudamérica: Colombia, Venezuela, Brasil, Ecuador, Perú, Bolivia y en el noroeste y centro de la Argentina. M. verticillata (Griseb) Epling, conocida vulgarmente como peperina, es la que tiene distribución más amplia y se la utiliza en diversos preparados medicinales.

M. verticillata es un arbusto aromático de 0.3 m a 2 m con hojas alargadas de 1 cm a 5 cm y flores blanquecinas que aparecen en verano. Los frutos son cápsulas pequeñas y secas, cada una con 4 semillas. El período de fructificación es en marzo y abril, y se cosecha en verano. Se utiliza principalmente en infusiones destinadas a reducir la diarrea y los vómitos, aunque también se emplea como digestivo, sedante, antiespasmódico y broncodilatador. Tiene propiedades insecticidas, antimicóticas y antiparasitarias. Se lo utiliza en la industria alimenticia para la preparación de licores y bebidas. El aceite esencial (AE) y los productos de decocción (PD) tienen actividad antibacteriana contra cepas de estafilococo y propiedades antivirales contra el herpesvirus simple y el herpes Suis, entre otros.

El análisis cromatográfico del AE revela los principales componentes: pulegona y mentona; otros elementos en concentración más baja son la alfa-pinena, la beta-pinena y limonena. Se considera que cualquiera de ellos o la combinación de 2 o más componentes son responsables de la actividad biológica del preparado.

En pacientes tratados frecuentemente con corticoides y en aquellos que no responden a estos agentes en la forma esperada, cualquier opción que permita su reemplazo es bienvenida. En China, un preparado a base de hierbas representa un papel fundamental en el tratamiento de las enfermedades alérgicas. En este trabajo, los autores analizaron las propiedades de M. verticillata, el AE y el PD. Se investigó la acción sobre los basófilos en un ensayo de beta-hexosaminidasa, en el que se comparó el efecto con el de la dexametasona y de la teofilina. Se determinó el porcentaje de linfocitos CD8+ en cultivos estimulados con los derivados vegetales y se analizó la producción de interferón (IFN)-gamma. El objetivo de este último procedimiento fue determinar si el PD y el AE pueden inducir desviación de los linfocitos a un fenotipo colaborador (Th) 1.

Métodos

Se estudiaron los basófilos y los linfocitos de 30 pacientes alérgicos de 1 a 20 años, con pruebas cutáneas positivas frente a Hormodendrum hordei (Cladosporium sphaerospermun), Rizophus arrhizus, Aspergillus fumigatus, Alternaria tenuis y Mucor mucedo.

Se utilizaron hojas verdes y los pecíolos finos de M. verticillata, cosechada en 2004. El PD se obtuvo mediante la suspensión de 5 g de material crudo en 100 ml de agua destilada. La mezcla se hirvió durante 20 minutos; luego se clarificó y filtró. El producto final se esterilizó en autoclave a 115º C, 20 minutos, y se almacenó a -20º C hasta su utilización. Se empleó una concentración final de 104 µg/ml.

Para la preparación del AE se emplearon 60 g de material que fue tratado con hidrólisis en agua destilada durante 3 horas; la concentración final fue del 4.8%. La fase aceitosa se separó de la líquida por diferencia de densidad. El AE se emulsionó en dimetil-sulfóxido.

Los basófilos concentrados se obtuvieron con la técnica Benveniste, modificada por Grinstein. La respuesta in vitro inducida por alergenos específicos se determinó en 5 condiciones para cada paciente: sólo alergeno, alergeno más dexametasona, más teofilina, más PD y más AE derivados de M. verticillata. Los estudios sin alergeno permitieron determinar la desgranulación espontánea inespecífica de los basófilos. Se emplearon diferentes concentraciones de PD y de AE para establecer la dosis óptima de inhibición de la liberación de beta-hexosaminidasa, después de 15 minutos de incubación.

Para los cultivos de linfocitos, la sangre se diluyó en un tercio con solución de Hanks y se centrifugó en gradiente de Hystopaque-1077. Se obtuvieron los linfocitos a partir de la interfase del centrifugado. Las células separadas (2 x 105/ml) se cultivaron en condiciones estériles con suero fetal bovino al 10% y con antibióticos al 1%. Los cultivos se estimularon con diferentes concentraciones de los derivados vegetales: 104 mg/ml, 0.52 mg/ml, 416 µg/ml de PD y 9 mg/ml, 4.5 mg/ml y 3.6 mg/ml de AE.

La cantidad de linfocitos CD8+ en los cultivos se determinó con inmunofluorescencia indirecta con anticuerpo monoclonal anti-CD8 y un segundo anticuerpo marcado con fluoresceína. Se consideró normal el porcentaje de CD8+ de 20% a 25%. En el suero y en los cultivos de los pacientes alérgicos se cuantificó la síntesis de IFN-gamma mediante enzimoinmunoensayo.

Resultados

Los basófilos de todos los pacientes alérgicos liberaron beta-hexosaminidasa en presencia del alergeno específico. Esta liberación se redujo cuando se agregó dexametasona (0.36 mg/ml), teofilina (1.83 mg/ml) o las diferentes concentraciones de los derivados vegetales, en combinación con el alergeno. El PD y el AE derivados de M. verticillata inhibieron la liberación de beta-hexosaminidasa in vitro. El efecto de las fracciones vegetales fue similar al que se obtuvo con dexametasona y teofilina. Sin embargo, en ausencia del antígeno, los derivados vegetales no inhibieron la liberación enzimática.

Los cultivos linfocitarios revelaron estimulación celular, en presencia de la fracción vegetal; los índices de proliferación fueron similares a los obtenidos con el mitógeno convencional, fitohemaglutinina (PHA). La inmunofluorescencia reveló que el 40% de los linfocitos estimulados en cultivo con PD o con AE de M. verticillata fue CD8+. No se detectó IFN-gamma en el suero de los pacientes alérgicos. Los cultivos de linfocitos no estimulados presentaron mayor concentración de IFN-gamma en comparación con el suero (p < 0.05). La síntesis de IFN-gamma fue variable en los cultivos celulares estimulados con PD o con AE. El PD no estimuló la síntesis de IFN-gamma, mientras que los AE lo hicieron en forma significativa con la producción de la citoquina, en comparación con los cultivos no estimulados o los cultivos con PD.

Discusión

M. verticillata es una hierba que tradicionalmente se emplea en Sudamérica como agente con propiedades digestivas. Recientemente también se la utilizó en el tratamiento del asma por sus propiedades antiinflamatorias. Varios estudios demostraron que, in vitro, ejerce acción antibacteriana y antiviral. No obstante, su efecto sobre el sistema inmunológico todavía sigue en estudio. En general, los trabajos aplican la liberación de histamina por células cebadas y por basófilos estimulados con antígeno como marcador de la desgranulación en reacciones alérgicas inmediatas. La beta-hexosaminidasa es una hidrolasa ácida presente en los gránulos del interior de los basófilos y de las células cebadas, que se libera junto con la histamina cuando las células se activan. Por este motivo, se acepta que la beta-hexosaminidasa es un marcador de desgranulación.

En este trabajo se demostró que el PD y que los AE derivados de M. verticillata tienen la capacidad de inhibir la liberación enzimática entre 29% y 47% para PD y entre 33.9% y 39.4% para los AE. La inhibición fue similar a la que se obtuvo con dexametasona y con teofilina, drogas que todavía se utilizan con frecuencia en la Argentina para el tratamiento del asma. La dexametasona estimula la producción de AMPc e inhibe la desgranulación en basófilos y células cebadas. Es una droga que se indica específicamente en los ataques de asma. Por su parte, la teofilina es una xantina que actúa como inhibidor de la fosfodiesterasa; la enzima inactiva el AMPc y favorece la desgranulación de los basófilos y de las células cebadas. La teofilina aumenta los niveles de AMPc, inhibe el proceso de desgranulación y también es comúnmente utilizada en el asma.

Los cultivos de linfocitos mostraron que M. verticillata modula la respuesta Th1 con expansión de la población citotóxica; los resultados son parecidos a los que obtuvieron otros grupos con diferentes especies medicinales. En la mayoría de los pacientes, la concentración de IFN-gamma no fue cuantificable. Es posible, añaden los autores, que en estos sujetos, la falta de interleuquina (IL)-12 producida por macrófagos y células natural killer estimule en las células cebadas y en los basófilos la producción de IL-4 e inhiba la liberación de IFN-gamma. La cantidad óptima de PD y de AE necesaria para aumentar la síntesis de IFN-gamma no fue la misma en todos los pacientes. En este estudio, el PD derivado de M. verticillata no estimuló la síntesis de IFN-gamma pero, debido a que la muestra de análisis fue pequeña, los resultados no pueden considerarse definitivos.

M. verticillata se considera un producto vegetal no tóxico cuyo uso está autorizado para propósitos medicinales, y que figura como droga oficial en la Farmacopea Nacional Argentina (sexta edición).

Conclusiones

En presencia del alergeno específico, tanto el PD como el EA de M. verticillata inhiben la liberación de beta-hexosaminidasa de los basófilos; el efecto es similar al que se obtiene con dexametasona o con teofilina. Además, los derivados vegetales modulan positivamente las respuestas dependientes de los Th1 con expansión de la población celular con propiedades citotóxicas. En presencia de los AE también se verifica aumento de las células que producen IFN-gamma, que es una citoquina que antagoniza el efecto de la IL-4 que participa en la producción de IgE. En conjunto, los resultados sugieren que los derivados vegetales no tóxicos podrían ser beneficiosos para el tratamiento de las enfermedades alérgicas.

Especialidad: Alergia - Bibliografía