Los Polimorfonucleares de los Pacientes con Enfermedad Granulomatosa Crónica Tratados con Interferón Gamma Producen más Óxido Nítrico

• AUTOR : Beni F, Fattahi F, Pourpak Z, Moin M y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : Increased Production of Nitric Oxide by Neutrophils From Patients With Chronic Granulomatous Disease on Interferon-Gamma Treatment
• CITA : International Immunopharmacology 12(4):689-693, Abr 2012
• MICRO : En los sujetos con enfermedad granulomatosa crónica (autosómica recesiva o ligada al cromosoma X), el tratamiento con interferón gamma se asocia con mayor producción de óxido nítrico por los neutrófilos. El mecanismo explicaría el efecto antimicrobiano de este agente biológico.

Introducción

Las infecciones bacterianas y micóticas recurrentes, en ocasiones muy graves, caracterizan a la enfermedad granulomatosa crónica (EGC), un trastorno que compromete al sistema inmune innato. La EGC obedece a la presencia de mutaciones en alguno de los genes que codifican las subunidades de la NADPH oxidasa en las células fagocíticas. En consecuencia, la actividad enzimática está ausente o considerablemente reducida. Por lo general, los pacientes con EGC reciben en forma crónica profilaxis con antibióticos (trimetoprima-sulfametoxazol [TMP-SMX]), antimicóticos (itraconazol) e interferón gamma (IFN-gamma). Aún así, el índice anual de mortalidad en los enfermos con EGC autosómica recesiva y con EGC ligada al cromosoma X es de 2% y 5%, respectivamente.

En un estudio, el tratamiento prolongado por vía oral con TMP-SMX se asoció con una reducción significativa del índice de infecciones. En otro trabajo, la administración subcutánea de IFN-gamma 3 veces por semana disminuyó en un 67% el riesgo de complicaciones infecciosas graves en los pacientes con cualquier forma genética de EGC; sin embargo, los enfermos que más se beneficiarían serían los niños de menos de 10 años.

A pesar de los excelentes resultados observados, por el momento, los mecanismos de acción del IFN-gamma en la prevención de infecciones se conocen muy poco. Algunos trabajos sugirieron una mayor producción de superóxido y mayor capacidad bactericida de los neutrófilos como así también mayor expresión de los genes de los componentes de la oxidasa (por ejemplo citocromo b558) en asociación con la terapia con IFN-gamma. Los autores recuerdan que los polimorfonucleares (PMN) de los enfermos con EGC tienen defectos en el sistema de producción de superóxido de forma tal que no generan aniones superóxido (O2-), peróxido de hidrógeno u otras especies reactivas de oxígeno durante el proceso de la fagocitosis. El óxido nítrico (ON) es un blanco importante del superóxido y los PMN producen ON en forma espontánea y al ser activados; diversos estudios demostraron que este proceso representa un mecanismo importante de defensa antimicrobiana, por sus efectos bactericidas y citotóxicos. En los PMN de los sujetos normales, el ON reacciona rápidamente con el O2- para generar peroxinitrito, un anión estable; la reacción, en cambio, no ocurre en los PMN de los pacientes con EGC; en este caso, el ON per se cumpliría una función esencial y se ha visto que los PMN de estos enfermos producen ON in vitro. En opinión de los autores, el efecto terapéutico del IFN-gamma podría tener que ver, al menos en parte, con la producción de ON; esta teoría fue evaluada en la presente investigación.

Pacientes y métodos

Se estudiaron 19 pacientes con EGC, diagnosticada con la prueba de reducción del nitroazul de tetrazolio (nitroblue tetrazolium test [NBT]) y la prueba de la dihidrorodamina (DHR). Los pacientes eran asistidos en el Immunology, Asthma and Allergy Research Institute (IAARI), un centro especializado en la atención de inmunodeficiencias. Todos los enfermos recibían en forma profiláctica 5 mg/kg de TMP-SMX dos veces por día y 12 de ellos también estaban tratados con IFN-gamma (50 µg/m2) 3 veces por semana. Un enfermo recibía cefalosporinas y 6 pacientes estaban medicados con itraconazol. Según el tratamiento, los pacientes se clasificaron en dos grupos: el grupo I (n: 7) abarcó enfermos tratados únicamente con TMP-SMX en tanto que el grupo II (n: 12) estuvo integrado por los pacientes que recibían TMP-SMX más IFN-gamma. También se evaluó un grupo control de sujetos sanos, no fumadores.

Los PMN se aislaron de sangre entera mediante gradiente de centrifugación en Ficoll-Hypaque a 4ºC con la finalidad de evitar la activación celular. Las células aisladas se cultivaron en presencia de IFN-gamma recombinante humano (100 U/ml). La concentración sérica de nitritos y nitratos (NOx) se conoció con la reacción de Griess. Las comparaciones estadísticas se realizaron con pruebas de Mann Whitney y de Wilcoxon.

Resultados

La mediana de edad de los 9 varones y 10 mujeres con EGC fue de 6 años (1.5 a 27 años): 19 años en el grupo I (2 a 27 años) y 6 años en el grupo II (1.5 a 19 años). La edad del grupo control fue de 8.5 años (2 a 35).

Los niveles séricos de NOx fueron de 24.9 ± 8.4 µmol/l en el grupo control, 24.3 ± 5.7 µmol/l en el grupo I y 32.2 ± 5.6 µmol/l en el grupo II. Los pacientes tratados con IFN-gamma presentaron niveles significativamente más altos de NOx, respecto de los otros dos grupos (p = 0.006 en comparación con el grupo control y p = 0.04 respecto de los enfermos del grupo I). En el grupo II, la producción del NOx fue mayor en los varones respecto de las niñas.

Las concentraciones séricas promedio de NOx fueron de 24.1 µmol/l en los 2 pacientes que recibieron IFN-gamma durante 3 meses, 28.7 µmol/l en los 3 enfermos tratados con IFN-gamma por 6 meses, 35 µmol/l en el enfermo medicado durante 9 meses y 36.2 µmol/l en los pacientes que recibieron IFN-gamma durante 12 meses.

En los experimentos in vitro, la producción de NOx aumentó en los PMN incubados con 100 U de IFN-gamma, en los dos grupos de enfermos. En el grupo I se comprobó un aumento de 202.2 ± 60.6 nmol/2×106 PMN a 242.9 ± 79.8 nmol/2×106 PMN, luego de 24 horas de incubación con IFN-gamma (p = 0.031). En el grupo II, las concentraciones fueron de 206.0 ± 79.9 nmol/2×106 PMN y 277.5 ± 92.5 nmol/2×106 PMN en forma basal y luego del agregado de IFN-gamma, respectivamente (p = 0.001). El incremento también se registró en los PMN obtenidos de los sujetos sanos: 154.7 ± 55.7 nmol/2×106 PMN y 209.5 ± 76.9 nmol/2×106 PMN, respectivamente (p = 0.023). El 89.5% de los pacientes con EGC (17 de 19) tenía la forma autosómica recesiva; los 2 enfermos restantes presentaban EGC ligada al cromosoma X. No se registraron diferencias significativas en el aumento de la producción de NOx, en asociación con el IFN-gamma, según el subtipo genético de la enfermedad.

Discusión

Los autores evaluaron la producción de NOx in vivo e in vitro en pacientes con EGC tratados con TMP-SMX aisladamente o en combinación con IFN-gamma. Los enfermos que recibían IFN-gamma presentaron niveles séricos más altos de NOx. Asimismo, la incubación de los PMN con IFN-gamma se asoció con mayor producción de NOx en todos los participantes.

Los pacientes que recibían TMP-SMX más IFN-gamma presentaron concentraciones séricas mayores de NOx en comparación con los enfermos tratados únicamente con TMP-SMX y los sujetos del grupo control. Por su parte, se comprobó que los varones con EGC tratados con IFN-gamma tuvieron niveles superiores de NOx respecto de las mujeres, un fenómeno que sugiere que la producción de NOx se vincula con el sexo. Igualmente, un estudio previo en 667 hombres y 1 316 mujeres aparentemente sanos reveló niveles más altos de NOx en el suero de los varones jóvenes; también se observó que la concentración de NOx se relaciona más fuertemente con los triglicéridos que con otras fracciones de lípidos.

En el presente estudio, la generación de NOx también se relacionó con la cantidad de meses de terapia con IFN-gamma; sin embargo, los resultados deben interpretarse con cautela por el escaso número de enfermos en cada grupo y porque en un trabajo previo, la terapia con IFN-gamma durante 6 meses no se asoció con aumento de los niveles de NOx. Las diferencias, añaden los autores, podrían obedecer al diseño del estudio como así también a la metodología aplicada para valorar los niveles de NOx.

Aunque la incubación de los PMN de los tres grupos de participantes con IFN-gamma se asoció con mayor liberación de NOx, la respuesta fue más importante en los enfermos que recibían el inmunomodulador. Los resultados no coinciden con los de una investigación anterior en la cual no se comprobó mayor producción de NOx luego de la incubación de los PMN con IFN-gamma. Sin embargo, en otro estudio se observó una mayor síntesis de NOx cuando los PMN de pacientes con EGC fueron estimulados con fMLP. En la presente ocasión, en cambio, se determinó la producción espontánea de NOx por los PMN. Los autores destacan que la medición de la formación de NOx es difícil por su corta vida media en presencia de O2 y otras moléculas que participan en la depuración, motivos por los cuales todos los hallazgos merecen confirmaciones en investigaciones futuras en una mayor cantidad de enfermos, concluyen los expertos.

Especialidad: Bibliografía - Clínica Médica