Movilización de Precursores Hematopoyéticos Mediada por Natalizumab

• AUTOR : Jing D, Oelschlaegel U, Bornhäuser M y colaboradores
• TITULO ORIGINAL : CD49d Blockade by Natalizumab in Patients with Multiple Sclerosis Affects Steady-State Hematopoiesis and Mobilizes Progenitors with a Distinct Phenotype and Function
• CITA : Bone Marrow Transplantation 45(10):1489-1496, Oct 2010
• MICRO : El natalizumab, un antagonista del CD49d, permite una movilización de precursores hematopoyéticos a sangre periférica por un mecanismo diferente y sinérgico al del G-CSF.

Introducción

En los últimos años, ha aumentado el número de trasplantes autólogos y alogénicos que emplean células progenitoras hematopoyéticas (CPH) obtenidas de sangre periférica, tras la movilización desde la médula ósea en respuesta al uso de factores estimulantes de colonias, como el G-CSF. La cantidad de células movilizadas varía entre los pacientes, pero se estima que un 14% de los donantes autólogos responden en forma subóptima a la estimulación. Con el fin de mejorar los resultados, se ha empleado la asociación de G-CSF y plerixafor, un antagonista de CXCR-4, con buenos resultados en pacientes con mieloma o linfomas con intenso tratamiento previo. Los anticuerpos dirigidos contra los antígenos 4 muy tardíos de las integrinas (VLA-4/CD-49d) son capaces de movilizar progenitores hematopoyéticos con acción a largo plazo; el natalizumab es el primer antagonista de la integrina alfa-4 empleado para el abordaje terapéutico de la esclerosis múltiple (EM), ya que al unirse a la integrina, bloquea su migración al cerebro y reduce la inflamación. Durante el tratamiento con este agente, se observó un aumento significativo de CPH CD34+ circulantes, por lo que se lo considera una alternativa para la movilización electiva de CPH, aunque no se lo estudió en profundidad. En este estudio, se evaluaron la médula ósea, la sangre periférica y los niveles de células CD34+ de pacientes con EM tratados con natalizumab y se los comparó con los de donantes sanos tras la estimulación con G-CSF y con niveles de sangre periférica de pacientes con EM que no recibieron el fármaco.

Materiales y métodos

Se analizó la sangre periférica (n =8) y la médula ósea (n = 4) de 8 pacientes con EM en tratamiento con 300 mg de natalizumab intravenoso en forma mensual; las muestras se obtuvieron después de 1 mes de la última infusión. Además, se obtuvo sangre periférica de 6 pacientes con EM que no recibían este agente y de 11 voluntarios sanos tras la estimulación con G-CSF, y médula ósea de 11 voluntarios sanos. Se empleó lenograstim, en dosis de 7.5 µg/kg subcutáneo durante 5 días. Por último, se analizaron 3 aféresis de células CD34⁺ de donantes sanos movilizadas con G-CSF y otras 3 de pacientes con EM tras el tratamiento con natalizumab.

Las CPH se identificaron por citometría de flujo empleando marcadores CD34 y CD45, además de otros anticuerpos para identificar la expresión de CD11a/CD18, que es una beta2 integrina, L-selectina, y CD31, la molécula de adhesión entre endotelio y plaquetas. Durante los procedimientos de aféresis, se separaron las CPH mediante cuentas magnéticas conjugadas con un anticuerpo CD34, lo que permitió una pureza de selección del 95.6 ± 0.9% para la movilización con G-CSF y del 91.2 ± 0.6% para el natalizumab. Se sembró una muestra de 1 x 105 células de cada aféresis en placa en presencia de citoquinas recombinantes; tras 14 días se realizó el recuento de unidades formadoras de colonias eritroides (UFC-E), mieloides (UFC-GM) y mixtas (UFC-GEMM).

Además, se realizó un estudio para determinar la migración de las CPH, con adición de un factor derivado de células del estroma (SDF-1), en comparación con la migración celular espontánea.

Por último, se realizó un análisis con PCR en tiempo real para comparar las características de las células CD34+ movilizadas por natalizumab y por G-CSF, y un estudio de proliferación de CPH.

Los resultados descriptivos se expresaron como medianas y rangos. Las variables continuas se compararon mediante la prueba de Mann-Whitney; se consideraron significativos los valores de p < 0.05.

Resultados

La concentración de células CD34+ fue significativamente mayor en la médula ósea de los pacientes con EM en tratamiento con natalizumab que en la de voluntarios sanos (p = 0.005) y guardó relación directa con el número de cursos del fármaco que habían recibido. También se comprobó un recuento mayor en sangre periférica de pacientes con EM bajo este agente, en comparación con el de los que recibían otro tipo de tratamiento; este último grupo tuvo recuentos comparables con los de los voluntarios sanos que no recibieron estimulación con G-CSF.

En 2 pacientes con EM se realizaron determinaciones repetidas; se observó un recuento máximo de CD34+ en el día 4 luego de la infusión. Todas las moléculas de adhesión mostraron una disminución luego de la primera infusión de natalizumab.

La expresión de los antígenos estudiados fue menor en los pacientes con EM tratados con natalizumab que en los voluntarios sanos, así como la expresión de CD-133 en las células CD34+.

Las células obtenidas por aféresis de los pacientes tratados con natalizumab también presentaron menor expresión del antígeno primitivo CD-133 que aquellas de donantes estimulados con G-CSF, y la expresión de CXCR-4 (CD184) fue significativamente superior en el primer grupo que en los voluntarios sanos (43.9% contra 15.1%; p < 0.05). Este antígeno se correlaciona con una migración de CD34+ significativamente mayor, ya que los pacientes tratados con natalizumab tuvieron un porcentaje de migración del 13.4% y los voluntarios, de 6.1% (p < 0.05).

Las células movilizadas con natalizumab contenían mayor cantidad de ARNm para p21 y menor para metalopeptidasa de matriz-9 que las movilizadas con G-CSF.

Al comparar las células extraídas por aféresis, se observaron menores recuentos absolutos de CD34+ en las muestras estimuladas con natalizumab que con G-CSF, además de generar menores recuentos absolutos de colonias eritroides y mieloides; sin embargo, el desarrollo de colonias por 1 000 células CD34+ fue comparable en ambos grupos. Los pacientes tratados con natalizumab tuvieron mayor desarrollo de UFC-E (89.2%), mientras que los que recibieron G-CSF tuvieron un porcentaje similar de UFC-E (46.7%) que de UFC-GM (52.7%). Estos datos señalan que los precursores movilizados por natalizumab son distintos de los movilizados por G-CSF.

Discusión

Este estudio demostró que la administración repetida de natalizumab produce un aumento persistente de células CD34+ en la médula ósea. Estos recuentos elevados no guardan relación con la EM, ya que los enfermos tratados con otra medicación no presentaron ese aumento. Sin embargo, no puede excluirse la posibilidad de que la disminución de moléculas de adhesión provoque un predominio de CD34+ en el aspirado. Como sólo se analizaron las células positivas para CD34, se englobaron una variedad de células primitivas, que podrían tener diferente expresión de CD49d; esta heterogeneidad de poblaciones celulares podría explicar las diferencias de los niveles de ARNm de genes involucrados en el control del ciclo celular (p21) y en el procesamiento de la matriz (MMP9).

El sistema SDF-1/CXCR-4 es el principal regulador de la migración y localización de las CPH. Se comprobó que el antalizumab moviliza células con mayor expresión de CXCR-4 y menor de moléculas de adhesión (L-selectina, Pecam-1, CD-44), en comparación con G-CSF. Resta aclarar si la diferente expresión de moléculas de adhesión representa sólo la movilización de células con menor adhesión o que se encuentran en diferente estado de diferenciación. El natalizumab y el G-CSF tienen un mecanismo diferente y sinérgico de movilización celular; en modelos preclínicos, se los empleó en forma combinada.

El hallazgo de niveles inferiores de MMP9 en las células movilizadas por natalizumab indica un equilibrio hemopoyético de esta población. Además, estás células presentaron mayores niveles de CXCR-4, lo que indica mayor actividad migratoria, y podría asociarse con un mayor anidamiento de CPH. Cabe destacar que otro estudio demostró menor capacidad migratoria en las células movilizadas con natalizumab.

La baja expresión de CD-133 revela que las células movilizadas por natalizumab podrían estar más allá del nivel de compromiso multipotente; esta hipótesis concuerda con el predominio de colonias eritroides generadas por las CD34+ movilizadas por natalizumab, aunque podría ser explicada por diferente expresión de moléculas de adhesión entre progenitores eritroides y mieloides-macrofágicos.

Este agente permite una adecuada disrupción de las moléculas de adhesión entre las CPH y su nicho, lo que posibilita su movilización con un mecanismo alternativo al del G-CSF. Aunque la vida media del natalizumab impide su empleo en donantes sanos o en aquellos que se someten a recolección autóloga, existen otros inhibidores selectivos del CD49d en investigación. En general, se trata de moléculas pequeñas, que pueden combinarse adecuadamente con G-CSF o con el bloqueo SDF-1/CXCR-4 para aumentar en forma significativa la movilización de precursores hematopoyéticos.

Especialidad: Bibliografía - Hematología