Nomegestrol Acetate Suppresses Human Endometrial Cancer RL95-2 Cells Proliferation in Vitro and in Vivo Possibly related to Upregulating Expression of SUFU and Wnt7a

 

• Título: Nomegestrol Acetate Suppresses Human Endometrial Cancer RL95-2 Cells Proliferation in Vitro and in Vivo Possibly related to Upregulating Expression of SUFU and Wnt7a
• Autores: Ma A, Xie S, Zhou J, Zhu Y
• Institución: Fudan University, Shanghai, China
• Fuente: International Journal of Molecular Sciences 18(7):1-18, Jun 2017
• Esencia: El acetato de nomegestrol actuaría sobre las líneas celulares correspondientes al carcinoma endometrial tipo I mediante la modificación del nivel de actividad de los genes SUFU y Wnt7a.

Introducción y objetivos

De acuerdo con lo estimado, el carcinoma endometrial es el cáncer ginecológico más frecuente, en especial el adenocarcinoma endometrioide, que representa el 80% de los casos de carcinoma endometrial y, en hasta el 14% de los casos, afecta a mujeres menores de 40 años. En general, el carcinoma endometrial observado en mujeres en edad fértil tiene un pronóstico favorable y pertenece al tipo I, positivo para receptores de estrógenos y progesterona (ER/PR). En estos casos, el tratamiento habitual es la cirugía y la terapia adyuvante. Si bien la histerectomía con ooforectomía bilateral permite lograr la remisión completa en la mayoría de los casos, también compromete la fertilidad; en consecuencia, se requieren estrategias alternativas para las pacientes que desean preservarla.

El crecimiento del carcinoma endometrial es estimulado por los estrógenos e inhibido por la progesterona; además, la progesterona favorece su diferenciación. Esto suscitó el uso de derivados de la progesterona con fines terapéuticos, entre los cuales se incluyen el acetato de medroxiprogesterona (AMP) y el acetato de megestrol. Sin embargo, el uso de AMP se asocia con un aumento del riesgo de trombosis potencialmente fatal, además de ser ineficaz en algunos casos.

El acetato de nomegestrol (NOMAC) es un progestágeno potente y selectivo, con una actividad superior en comparación con el AMP. Su empleo resulta apropiado en pacientes con trastornos ginecológicos dependientes de la acción hormonal,y como componente de la terapia de reemplazo en mujeres menopáusicas y de la terapia anticonceptiva. La droga no aumenta el riesgo de cáncer de mama; por el contrario, parece inhibir su aparición. El mecanismo de acción del NOMAC consiste en la unión específica a los receptores de progesterona, y se asocia con un perfil de tolerabilidad más aceptable debido a su acción antiandrogénica. No obstante, hasta el momento no se cuenta con información específica sobre el mecanismo de acción de la droga y la reducción del riesgo de cáncer ante su empleo.

La proliferación y la supervivencia celular, la organización tisular y el mantenimiento de las células madre se asocian con la acción de la vía de señalización de Hedgehog (Hh). El gen suppressor of fused homolog (SUFU) codifica para una proteína que inhibe a la vía Hh y reduce la aparición de tumores al impedir la localización nuclear de las proteínas Gli o la transcripción del gen GLI. También se informó que la vía Hh modula la vía de señalización Wnt al aumentar el nivel de la secreted frizzled-related protein 1 (SFRP1) en las células intersticiales. Es sabido que la alteración en la activación de la vía Wnt/beta catenina interviene en la aparición del carcinoma endometrial, especialmente del carcinoma de tipo I. La beta catenina es una proteína que indica la actividad de la vía Wnt y aumenta la proliferación celular. Además, la proteína Wnt7 participa en la organización del músculo liso uterino y en el mantenimiento de la función del útero en mujeres adultas.

El presente estudio se llevó a cabo en líneas celulares de cáncer endometrial humano tipo I y II, denominadas RL95-2 y KLE, respectivamente. Las primeras se correspondieron con el cáncer endometrioide positivo para ER y las segundas, con el carcinoma negativo para ER. Estos modelos celulares se emplearon con el fin de analizar el efecto del NOMAC sobre el crecimiento del carcinoma endometrial humano. Además, los autores evaluaron los efectos anticancerígenos del NOMAC in vivo, en ratones RL95-2, y el efecto del NOMAC sobre la expresión genética en las células RL95-2, mediante la técnica de microarray.

Resultados

El tratamiento con NOMAC disminuyó la viabilidad celular de un modo dependiente de la dosis. El NOMAC inhibió el crecimiento de las células RL95-2 de un modo dependiente de la concentración, en tanto que el AMP no inhibió la proliferación ante el uso de diferentes concentraciones. No se halló un efecto inhibitorio considerable sobre las células KLE ante la exposición a ninguna de las drogas. A continuación, se evaluó la inhibición de la proliferación generada por el NOMAC sobre las líneas celulares RL95-2 y KLE. En las células RL95-2 se observó la disminución significativa de la síntesis de ADN ante la exposición al NOMAC en comparación con lo hallado en el grupo control. Esta diferencia no se observó en las células KLE.

El efecto del NOMAC se evaluó sobre la expresión genética en la línea celular RL95-2. Como resultado se halló aumento de la expresión de 329 genes y la disminución de la expresión de 400 genes en comparación con lo hallado en las células control. La expresión de los genes vinculados con la apoptosis no fue modificada, en tanto que la expresión de los genes relacionados con la proliferación celular tumoral se modificó significativamente. Los autores seleccionaron los genes más involucrados en la proliferación celular para efectuar un análisis más profundo. Luego, investigaron el efecto del NOMAC sobre la expresión del ARNm de los genes Wnt7a, beta catenina, SUFU, PTCH2 yGli2. El tratamiento con NOMAC de las células RL95-2 generó el aumento de la expresión del ARNm de los genes SUFU y Wnt7a, en tanto que no modificó significativamente el nivel del ARNm de los demás genes evaluados.

La expresión del gen SUFU aumentó de manera significativa ante la exposición al NOMAC en dosis de 20 a 100 µmol/l, en tanto que la expresión del gen Wnt7a fue significativamente superior en las células RL95-2 tratadas con 100 µmol/l de NOMAC. La expresión del ARNm de los genes SUFU y Wnt7a en las células KLE no se modificó. El NOMAC aumentó los niveles de las proteínas SUFU y Wnt7a de un modo dependiente de la concentración en las células RL95-2. Como era de esperar, el efecto no se observó en las células KLE.

El modelo elaborado en ratones, con el fin de evaluar los efectos antitumorales del NOMAC in vivo, incluyó la inoculación de los animales con células RL95-2 y la selección de aquellos que presentaron tumores de 100 mm3. Luego, los animales fueron divididos en cinco grupos y tratados con solvente, 100 mg/kg de AMP o 50, 100 y 200 mg/kg de NOMAC, respectivamente. Luego de 28 días de tratamiento, el peso tumoral ante la exposición al NOMAC y al AMP fue significativamente inferior en comparación con lo observado en el grupo control. Además, se verificó la disminución del volumen tumoral durante el período de observación en los cuatro grupos que recibieron tratamiento. La comparación entre el efecto del tratamiento con 200 mg/kg de NOMAC o 200 mg/kg de AMP indicó la superioridad significativa de la primera droga en términos de la disminución del crecimiento tumoral. Desde el punto de vista histológico, los tumores fueron adenocarcinomas endometrioides compatibles con las lesiones tipo I observadas en pacientes.

La evaluación de los niveles de SUFU y Wnt7 en los tejidos tumorales aumentó en los ratones tratados con NOMAC de un modo dependiente de la concentración. La expresión de SUFU aumentó en forma acentuada en el grupo tratado con 200 mg/kg de NOMAC en comparación con el grupo asignado a 100 mg/kg de AMP. En coincidencia con lo antedicho, la expresión de las proteínas SUFU y Wnt7 aumentó significativamente en los tejidos tumorales tratados con NOMAC.

Discusión

Los resultados obtenidos en el presente estudio permiten indicar que el NOMAC suprime significativamente el crecimiento de las células de carcinoma endometrial tipo I en líneas celulares RL95-2; esto no se observó en líneas celulares KLE correspondientes al carcinoma endometrial tipo II. La actividad anticancerígena del NOMAC fue validada mediante un modelo in vivo. El NOMAC presentó un efecto inhibitorio notorio sobre la progresión y el crecimiento de los tumores en comparación con el AMP. Además, el NOMAC aumentó la expresión de los genes SUFU y Wnt7a, tanto in vitro como in vivo.

Las células RL95-2 empleadas en el experimento pertenecieron al cáncer endometrial tipo I dependiente de la acción hormonal. El NOMAC inhibió en forma significativa el crecimiento de las células RL95-2, en tanto que el efecto sobre la línea celular KLE, correspondiente al carcinoma endometrial tipo II, fue leve. El efecto inhibitorio del NOMAC fue superior sobre el crecimiento de las células de carcinoma endometrial tipo I, sensibles a la acción hormonal, en comparación con lo observado en las células de carcinoma endometrial tipo II, no sensibles a la acción hormonal. Además, el NOMAC tuvo un efecto inhibitorio significativo sobre la síntesis de ADN en las células RL95-2, que no se observó en las células KLE. Es decir, el NOMAC puede tener un efecto terapéutico sobre las células de carcinoma endometrial tipo I.

El experimento in vivo permitió confirmar los hallazgos mencionados. La magnitud tumoral en los ratones tratados con NOMAC y AMP fue menor en comparación con lo observado en el grupo control. No se verificaron efectos adversos graves en los animales que recibieron NOMAC y AMP. El efecto inhibitorio del NOMAC aumentó en forma dependiente de la concentración. Los autores indican que el efecto del NOMAC fue superior en comparación con el del AMP para el tratamiento del carcinoma endometrial tipo I.

El análisis llevado a cabo indicó un aumento significativo del nivel de expresión de los genes SUFU y Wnt7a en las células RL95-2 tratadas con NOMAC. Este incremento coincidió con el aumento de la expresión de las proteínas correspondientes. Este hallazgo no se verificó en las líneas celulares KLE. El NOMAC inhibió la proliferación de las células de carcinoma endometrial tipo I RL95-2, efecto que parece relacionarse con el aumento de la expresión de los genes SUFU y Wnt7a.

Conclusión

El mecanismo de acción del NOMAC en las líneas celulares RL95-2 correspondientes al carcinoma endometrial tipo I y en modelos tumorales realizados en animales de experimentación parece relacionarse con la actividad de los genes SUFU y Wnt7a. Este efecto no se observó en líneas celulares KLE. Los resultados mencionados resultan de utilidad para comprender los mecanismos moleculares asociados con la actividad del NOMAC, así como para facilitar la creación de drogas nuevas y seguras para el tratamiento de las pacientes con carcinoma endometrial tipo I, especialmente ante la necesidad de preservar la fertilidad.

Especialidad: Bibliografía - Ginecología